Simultaneous detection and quantitation of O⁶‐monoacetylmorphine, morphine and codeine in urine by gas chromatography with nitrogen specific and/or flame ionization detection

Abstract

It is of importance to differentiate heroin intake from the absorption of opiate-containing pharmaceuticals or opiates from other sources. A method for the routine determination of O6-monoacetylmorphine (6-MAM), the specific metabolite of heroin in human urine, by gas chromatography and classical detectors without having recourse to gas chromatography/mass spectrometry-selected ion mode (GC/MS-SIM) is described. With dual detection by nitrogen selective and flame ionization detectors, the limits of detection for 6-MAM were determined to be 2 ng/mL and 4 ng/mL urine for a 10 mL sample. When applied to urines preliminarily screened for opiates, the results appeared consistent in comparison with those obtained by GC/MS-SIM. The method was also developed for the simultaneous quantitative analysis of morphine and codeine. The linearity was tested up to 600 ng/mL for the three compounds of interest 6-MAM, morphine and codeine and their absolute recoveries were 76%, 78%, 75% respectively.

Αναλυση Αλκαλοειδων Με Χρωματογραφικες Τεχνικες

“…Η διάσπαση περιορίστηκε με μείωση της θερμοκρασίας κάτω των 210 °C και χρήση αδρανοποιημένης στήλης OV-1 [131]. Εχει επίσης αναφερθεί χρήση στηλών τροποποιημένου διοξείδιο του πυριτίου, χαμηλής πολικότητας από μεθυλοσιλικόνη [136,140,156] ή 5% διφαινυλομεθυλοσιλικόνη [134,136,141] ή και υψηλής πολικότητας με περιεκτικότητα 50% σε διφαινυλομεθυλοσι λικόνη [136,139]. Η ανάλυση βιολογικών δειγμάτων έγινε και σε δύο στήλες συνδεδεμένες εν σειρά: Ultra-1 μεθυλοσιλικόνη (μη πολική) η πρώτη και ΗΡ-17, 50% φαινυλομεθυλοσιλικόνη (πολική) η δεύτερη, με ανίχνευση σε NPD [136].…”

“…Η ανίχνευση γίνεται με όλους τους ανιχνευτές της GC κυρίως όμως αναφέρεται ο FID [89,112,114,117,120,125,[128][129][130][131][132][133][134][135][136]144]. Η θερμοκρασία του ανιχνευτή φθάνει μέχρι και τους 300 °6 και η ανίχνευση γίνεται είτε σε αυτούσια δείγματα είτε μετά από παραγωγοποίηση, σε κατάλληλα παράγωγα των αλκαλοειδών (κυρίως φθοροπαράγωγα).…”

“…Ο ανιχνευτής NPD παρουσιάζει το πλεονέκτημα της σχετικής εκλεκτικότητας, αφού δεν ανιχνεύει ενώσεις που το μόριο τους δεν περιέχει άτομο αζώτου. Εχει χρησιμοποιηθεί εκτεταμένα στην ανάλυση των οπιούχων [118,126,[134][135][136][137][138][139][140] σε όλα τα δείγματα με ή χωρίς παραγω γοποίηση των αλκαλοειδών. Γενικά ο ανιχνευτής NPD προτιμάται για την ανάλυση αίματος λόγω της εκλεκτικότητας του σε σχέση με τον FID.…”

“…Η αντίδραση παρασκευής παραγώγου έχει στόχο την παρασκευή πτητικού και μη πολικού παραγώγου με δέσμευση των ελεύθερων υδροξυλίων ή μονήρων ζευγών ηλεκτρονίων πρωτοταγούς ή δευτεροταγούς ατόμου αζώτου και γίνεται με ακυλίωση ή σιλυλίωση των μορίων των αλκαλοειδών. Αντιδραστήρια που χρησιμοποιούνται για τη σιλυλίωση είναι τριμεθυλοσιλυλοακεταμίδιο (BSA) [122], μεθυλοτριμεθυλοσιλυλοτριφθοροακεταμίδιο (MSTFA) [123,132,134], bis-μεθυλοτριμεθυλοσιλυλοτριφθοροακεταμίδιο (BSTFA) [135,145,147], τριμεθυλοσιλυλο ακεταμίδιο (TMS) [117,144]. Για την ακυλίωση χρησιμοποιείται κυρίως οξικός αιθυλεστέρας ή οξικός ανυδρίτης [151,152,155].…”

“…Η χρήση της ρητίνης XAD-2 ως στατική φάση για την εκχύλιση 28 αλκαλοειδών εφαρμόστηκε για την προκατεργασία δειγμάτων αίματος πριν την ανάλυση με GC [127]. Οι μικροστήλες που χρησιμοποιούνται συνήθως, έχουν υλικό πλήρωσης Ci8 ή CN δεσμευμένο σε διοξείδιο του πυριτίου και οι διαλύτες παραλαβής είναι: μεθανόλη [146], 3% μεθανόλη σε χλωροφόρμιο [145], διχλωρομεθάνιο-ισοπροπανόλη (8:2) [134,157], διχλωρομεθάνιο-ακετόνη (1:1) [136,153], 10% ισοπροπανόλη σε χλωροφόρμιο [141].…”