Short communication. Evaluation of presumptive caudal fin blastema cells as candidate donors in intraspecies zebrafish (Danio rerio) chimaeras

Abstract

The blastema is a regenerative tissue with remarkable pluripotency. The aim of this work done on zebrafish (Danio rerio) was to define technical procedures required for obtaining and integrating blastema cells into embryos at the mid blastula transition stage (MBT) and the effect on survival, as well as the capacity to produce pigmented chimaeras. Wild type blastema cells were injected into gold type MBT embryos (E). Wild MBT blastomere cells were also injected into gold type MBT embryos as a control (C 1 ). A second control group, C 2 , was not subjected to any manipulation. Survival was evaluated at 24, 48 and 72 h after performing the chimaerism, and the rate of adult chimaeras evaluated. The results showed significant differences in embryo survival between the E and C 1 groups in embryo survival at 24 and 48 h postchimaerism (24 h: E-83.49% vs C 1 -54.8%, p < 0.05; 48 h: E-98.83% vs C 1 -85.13%, p < 0.05). There was no significant difference, at any time, between E and C 2 . The results at 72 h for E and the controls (E-89.41%; C 1 -84.12% and C 2 -92.55%) indicate that insertion of blastema cells does not have a negative effect on embryo development. The results in adults (E: 0 chimaeras from 7 specimens; C 1 : 5 chimaeras from 17 specimens) suggest that the dedifferentiation grade of the blastema cells may not be enough to generate germ-line chimaeras, but their condition of potentially dedifferentiating cells may be an advantage when using them as donor nuclei in somatic cloning by nuclear transplant.Additional key words: biodiversity, chimaerism, embryo, zebrafish. Resumen Evaluación de las células de la blastema de aleta caudal como donantes en quimeras intraespecíficas de pez cebraEl blastema es un tejido regenerativo con una pluripotencia remarcable. El objetivo del presente trabajo realizado en pez cebra (Danio rerio) es definir los procedimientos técnicos requeridos para la obtención e integración de células de la blastema en embriones en estadio MBT y su efecto en la supervivencia, así como también la capacidad de dar lugar a quimeras pigmentadas. Se inyectaron células de blastema de la estirpe silvestre en embriones gold en estadio MBT (E) y como control se inyectaron blastómeras silvestres MBT en embriones gold MBT (C 1 ). El segundo grupo control (C 2 ), no fue sometido a manipulación. Se evaluó la tasa de supervivencia a 24, 48 y 72 h post-quimerismo y la tasa de quimeras adultas. Los resultados mostraron diferencias significativas en la supervivencia embrionaria a las 24 y 48 h entre el grupo E y el C 1 (24 h: E-83,49% vs C 1 -54,8%, p<0,05; 48 h: E-98,83% vs C 1 -85,13%, p<0,05). No se detectaron diferencias significativas entre los grupos E y C 2 en ningún momento. Los resultados obtenidos a las 72 h, tanto en E como en los controles (E-89,41%; C 1 -84,12% y C 2 -92,55%) sugieren que la inserción de células de blastema no causa efectos negativos en el desarrollo del embrión. Los resultados obtenidos en adultos (E: 0 quimeras de 7 especímenes; C 1 : 5 quimeras de 17 especí-menes) apun...