Selection of high-affinity and high-specificity monoclonal antibodies for 1α,25-dihydroxyvitamin D

Mawer, E. B.; Berry, J. L.; Bessone, J. L.; Shany, Shraga; Smith, H. S.; White, Anne

doi:10.1016/0039-128x(85)90054-6

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“…The basis of this kit is selective immunoextraction of 1,25(OH) 2 D from serum or plasma with a specific monoclonal antibody bound to a solid support. This antibody is directed toward the 1a-hydroxylated A ring of 1,25 (OH) 2 D [40]. We concluded that this immunoextraction procedure was highly specific for the la-hydroxylated forms of vitamin D [39].…”

Section: Detection Of Vitamin D and Its Major Metabolitesmentioning

confidence: 99%

Detection of Vitamin D and Its Major Metabolites

Hollis

2011

Vitamin D

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In the interest of full disclosure, the author wishes to inform the readers that he has been a paid consultant to the DiaSorin Company. INTRODUCTIONVitamin D is a 9,10-secosteroid and is treated as such in the numbering of its carbon skeleton ( Fig. 47.1). Vitamin D occurs in two distinct forms: vitamin D 2 and vitamin D 3 . As shown in Figure 47.1, vitamin D 3 is a 27-carbon derivative of cholesterol; vitamin D 2 is a 28-carbon molecule derived from the plant sterol ergosterol. Besides containing an extra methyl group, vitamin D 2 differs from vitamin D 3 in that it contains a double bond between carbons 22 and 23. The most important aspects of vitamin D chemistry center on its cis-triene structure. This unique cis-triene structure makes vitamin D and related metabolites susceptible to oxidation, ultraviolet (UV)-light-induced conformational changes, heat-induced conformational changes, and attack by free radicals. As a rule, the majority of these transformation products have lower biological activity than vitamin D. It is important to note that, in humans, vitamins D 2 and D 3 provide similar potency (although some controversy exists as discussed in Chapter 61), and in this chapter the term vitamin D refers to both compounds.Metabolic activation of vitamin D is achieved through hydroxylation reactions at both carbon 25 of the side chain and, subsequently, carbon 1 of the A ring. Metabolic inactivation of vitamin D takes place primarily through a series of oxidative reactions at carbons 23, 24, and 26 of the side chain of the molecule. These metabolic activations and inactivations are well characterized and result in a plethora of vitamin D metabolites ( Fig. 47.2). Of the compounds shown in Figure 47.2, only four, vitamin D, 25-hydroxyvitamin D (25(OH)D), 24,25-dihydroxyvitamin D (24,25(OH) 2 D), and 1,25-dihydroxyvitamin D (1,25(OH) 2 D) have been extensively quantitated, and to date only two of those, namely, 25(OH)D and 1,25(OH) 2 D, provide any clinically relevant information. However, the quantitation of vitamin D and 24,25(OH) 2 D can provide important information in a research environment. Thus, this chapter addresses the quantitation of these four important vitamin D compounds. Further, it is not the intent of this chapter to address the detailed history of vitamin D metabolite analysis, as this can be obtained from CH 3 previous reviews [1e3]. Rather, the intent of this chapter is to describe how we currently measure vitamin D and its major metabolites in our laboratory, as well as to discuss the appropriate clinical judgments in the selection of a given compound for analysis.The first semiquantitative assay for vitamin D was a bioassay based on the rat-line test [4]. This assay was cumbersome, expensive, and relatively inaccurate. Real progress in vitamin D analysis was not achieved until the advent of high-specific-activity 3 H-labeled vitamin D 3 compounds [5]. The introduction of these tracers led to the development of competitive protein-binding assays (CPBA) for vitamin D and 25(OH)D [6,7]. A sho...

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Section: Detection Of Vitamin D and Its Major Metabolitesmentioning

confidence: 99%

Detection of Vitamin D and Its Major Metabolites

Hollis

2011

Vitamin D

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“…A facilidade de rearranjos de formas diidroxiladas de vitamina D inviabiliza o uso de cromatografia gás-líquido, dando-se preferên-cia à CLAE e outras técnicas, como imunoeletroforese [87][88][89] . Através de radioimunoensaios 26,27 foi possível a detecção de ng a pg de proteínas ligantes das formas mono e diidroxiladas 87,88 .…”

Section: Métodos Cromatográficosunclassified

“…Através de radioimunoensaios 26,27 foi possível a detecção de ng a pg de proteínas ligantes das formas mono e diidroxiladas 87,88 . Na separação de D 2 e D 3 e respectivos isômeros, bem como de outras formas hidroxiladas, as colunas de sílica são mais eficientes que as de alumina, podendo ser satisfatoriamente substituídas por fase ligada nitropolar 81 .…”

Section: Métodos Cromatográficosunclassified

Vitaminas lipossolúveis em alimentos: uma abordagem analítica

Paixão

Stamford

2004

Quím. Nova

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INTRODUÇÃOVitaminas são substâncias orgânicas presentes em muitos alimentos em pequenas quantidades e indispensáveis ao funcionamento do organismo, na forma de co-fatores. Sua ausência sistemática na dieta resulta, quase sempre, em crescimento e desenvolvimento deficientes e outras perturbações orgânicas, configurando-se um quadro sintomatológico característico de carência. Independentemente dos fatores do ambiente, a maioria dos organismos animais é incapaz de sintetizá-las por via anabólica, razão pela qual precisam ser incluídas nas dietas; em geral, são necessárias em microquantidades e em função da idade, sexo, estado fisiológico e atividade física do indivíduo. Os requerimentos nutricionais desses micronutrientes aumentam durante os períodos de crescimento, gestação e lactação, nas condições de trabalho intenso e ocorrência de determinadas doenças, notadamente as infecciosas 1,2 . Tradicionalmente, as vitaminas são classificadas em lipossolúveis e hidrossolúveis, de acordo com propriedades fisiológicas e físico-químicas comuns [1][2][3] . Os textos modernos de bioquímica 3 vêm propondo uma subclassificação para as hidrossolúveis, baseada em suas funções bioquímicas (captadoras e libertadoras de energia, papel na hematopoese, etc).As vitaminas lipossolúveis, notadamente A, D e E, têm merecido destaque quando do desenvolvimento de produtos enriquecidos e vitaminados, com o intuito de assegurar ao público infantil o suprimento destes micronutrientes essenciais ao crescimento, desenvolvimento e outras funções biológicas [1][2][3][4][5] . Crianças e jovens são extremamente sensíveis às variações dos teores de vitaminas A e D em função das baixas reservas ao nascer, rápido crescimento, diferenciação celular e alto "turnover" destes nutrientes em relação aos dos adultos [1][2][3] . O interesse crescente em relação à demanda orgânica de nutrientes, o estabelecimento de padrões nutricionais de ingestão, a preocupação mundial quanto à confiabilidade dos valores destes nutrientes declarados nos rótulos dos alimentos enriquecidos e vitaminados e a possível toxicidade de alguns deles tem ressaltado a necessidade de se determinar a composição química dos micronutrientes em alimentos. Impõe-se, assim, o desenvolvimento de metodologias seletivas e apropriadas ao reconhecimento de formas com distintas bioatividade e biodisponibilidade 1,6,7 . A estreita relação entre dieta e saúde faz com que aumente a preocupação dos consumidores em ingerir alimentos nutritivos ou de alta qualidade como, por exemplo, os fortificados ou enriquecidos e os vitaminados 5,6 . Lamentavelmente, a adição desses micronutrientes a produtos industrializados também tem sido utilizada como mera estratégia de "marketing", onde os interesses comerciais prevalecem, em detrimento das reais necessidades do indivíduo.A padronização de métodos para determinação das vitaminas lipossolúveis em alimentos é dificultada devido à diversidade de procedimentos descritos na literatura 8-9 e à morosidade da aplicação da técnica oficial 10 da "Association Official of A...

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A Sensitive Radioimmunoassay for 1,25-Dihydroxyvitamin D3 (Calcitriol) after High-Performance Liquid Chromatography of Plasma or Serum Extracts

Scharla¹,

Reichel²

1990

Calcium Regulating Hormones, Vitamin D Metabolites, and Cyclic AMP Assays and Their Clinical Application

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Selection of high-affinity and high-specificity monoclonal antibodies for 1α,25-dihydroxyvitamin D

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Detection of Vitamin D and Its Major Metabolites

Detection of Vitamin D and Its Major Metabolites

Vitaminas lipossolúveis em alimentos: uma abordagem analítica

A Sensitive Radioimmunoassay for 1,25-Dihydroxyvitamin D3 (Calcitriol) after High-Performance Liquid Chromatography of Plasma or Serum Extracts

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