Resumen del taller sobre el uso de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para distinguir entre Trypanosoma cruzi y tripanosoma rangeli

Abstract

Este taller se realizó con el propósito de transferir la tecnología de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la detección de J. cruzi y J . rangeli a laboratorios en Colombia involucrados en el diagnóstico y estudios epidemioló-gicos de la enfermedad de Chagas. Para demostración de la técnica se utilizaron muestras clínicas y epidemiológicas de áreas endémicas colombianas.En los ensayos se emplearon muestras de tripanosomas provenientes de diferentes medios de cultivo para evaluar el posible efecto de los componentes de estos medios sobre la sensibilidad del PCR. Se hizo extracción de ADN utilizando los métodos de ebullición, lisis hipotónica y geneclean. El ADN se amplificó utilizando oligonucleótidos sintéticos, correspondientes a una secuencia conservada de 22 nucleótidos dentro de un gen mini-exón. Los dos organismos fueron distinguidos por las movilidades electroforéticas de sus respectivos productos de amplificación, confirmando su identidad con sondas intergénicas específicas de especie, marcadas con digoxigenina dUTP. La hibridación se visualizó con la reacción de color del NBT.De un total de 28 muestras analizadas, se lograron 17 identificaciones que coincidieron con la clasificación original. De cinco muestras desconocidas, tres fueron identificadas como J. rangeli y dos como infecciones mixtas. Se presentaron resultados ambiguos en dos muestras, ocasionados por contaminación en el PCR.Solamente dos muestras no se pudieron identificar mediante PCR por problemas en la extracción del ADN de la muestra.Teniendo en cuenta estos resultados preliminaresse abre la posibilidad de utilizar esta técnica como una herramienta útil o método adicional a las técnicas de rutina para detectar y diagnósticar la enfermedad de Chagas en Colombia.

Trypanosoma rangeli : increase in virulence with inocula of different origins in the experimental infection in mice

“…It was isolated from a primate, Aotus trivirgatus, in 1982 in San Marcos, Sucre, Colombia, and was identi®ed by polymerase chain reaction (PCR; Campbell et al 1993). Moreover, an experimental study on Rhodnius prolixus was done in our laboratory to corroborate the parasite's transmission via the bug's, saliva.…”

Characterization of a Trypanosoma rangeli Strain of Colombian Origin

“…It was isolated from a primate Aotus trivirgatus in 1982 in San Marcos, Sucre, Colombia and identified by polymerase chain reaction (PCR) (Campbell et al 1993).…”

Detection of Trypanosoma cruzi and Trypanosoma rangeli infection in triatomine vectors by amplification of the histone H2A/SIRE and the sno-RNA-C11 genes

“…These strains were provided by Laboratorio de Parasitología, Instituto Nacional de Salud, (INS) (Bogotá, Colombia). Both parasites species were characterized by isoenzymes 24 and PCR using miniexon and minicircle sequences as targets 5,31,33 . The bulk parasite mass was cultivated in REI modified liquid medium, supplemented with 2% FCS and 100 µg/mL of gentamicin, and incubated at 24 °C.…”

“…Due to direct microscopic detection of trypanosomes, the traditional method for assessment of infection in vectors is not able to distinguish T. cruzi from T. rangeli infection, several polymerase chain reaction techniques have been developed 3,4,5,6,9,13,19,28,33,36,40,41 . However, current PCR assays used for mixed infection detection show some disadvantages such as the amplification of bands of similar size both in T. cruzi and T. rangeli 27,28 , the amplification of polymorphic fragments 11,19 , and bias to T. cruzi in the case of mixed T. cruzi and T. rangeli infection 9,33,36 .…”