Reliable and cost‐effective approach for diagnosis of heterozygous F8/F9 large deletions by quantitative real‐time PCR

Somatic/Germinal Mosaicism of a F8 Promoter Deletion Confounds Clinical Predictions in a Family with Haemophilia A: Key Role of Genotype Quantitation

“…La ausencia consistente y repetida de uno o varios fragmentos consecutivos, se consideró como gran deleción de uno o varios exones del F8. Las grandes deleciones fueron analizadas mediante el diseño de gap-PCR específicas de caso (Rossetti et al, 2004b) o mediante la estimación de dosis génica para el diagnóstico de portadoras por qPCR (Abelleyro et al, 2015).…”

“…La aplicación del algoritmo de análisis del F8, con la inclusión de técnicas diseñadas, desarrolladas y adaptadas o extendidas para abarcar por ejemplo la caracterización de todos los rearreglos asociados a los duplicones int22h (i.e., Inv22 tipos y variantes, y rearreglos asociados) e int1h (i.e., Inv1) en nuestro Laboratorio (IS-PCR para detectar la Inv22, Rossetti et al, 2005, Abelleyro et al, 2016, el diagnóstico molecular de portadoras de grandes deleciones (tanto del F8 como del F9, para HA y HB, respectivamente) por medición de dosis génica mediante PCR cuantitativa en tiempo real (Abelleyro et al, 2015) y el cribado de mutaciones pequeñas con un esquema multiplex optimizado mediante análisis de especies heterodúplex por CSGE (Williams et al, 1998; mejorado en este trabajo), han permitido la caracterización molecular del 96 % de las familias con HA, reduciendo al mínimo el número de falsos negativos y virtualmente a cero, el número de falsos positivos debido al minucioso análisis teórico de asignación genotipo-fenotipo propuesto.…”