Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) baseada no gene cpx para detecção de Actinobacillus pleuropneumoniae em suínos natural e experimentalmente infectados

Souza, Karina Koerich de; Klein, Cátia Silene; Kich, Jalusa Deon; Coldebella, Arlei; Alberton, Geraldo Camilo

doi:10.1590/s0103-84782008000700024

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“…São descritos testes de ELISA monovalentes e polivalentes para sorotipos, com sensibilidade e especificidade variando de 88,3% a 96,6% (Machado et al 2001). A importância de alta sensibilidade e especificidade em testes diagnósticos é fundamental para monitoramento dos rebanhos.Várias técnicas moleculares têm sido empregadas nos últimos anos para a detecção de App (Schaller et al 2001, Souza et al 2008, Hricinova et al 2010, Rossi et al 2013. Métodos que detectam o Ácido Desoxirribonucléico (DNA), como a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) são altamente sensíveis e de importância para diagnóstico, principalmente para microrganismos de cultivo fastidioso.…”

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“…Várias técnicas moleculares têm sido empregadas nos últimos anos para a detecção de App (Schaller et al 2001, Souza et al 2008, Hricinova et al 2010, Rossi et al 2013. Métodos que detectam o Ácido Desoxirribonucléico (DNA), como a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) são altamente sensíveis e de importância para diagnóstico, principalmente para microrganismos de cultivo fastidioso.…”

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Padronização da técnica de nanopartícula de ouro não modificada (AuNPs) para detecção de Actinobacillus pleuropneumoniae em pulmões de suínos

et al. 2014

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Standardization of unmodified gold nanoparticle (AuNPs) for detection of Actinobacillus pleuropneumoniae in swine lungs.] Padronização da técnica de nanopartícula de ouro não modificada (AuNPs) para detecção de Actinobacillus pleuropneumoniae em pulmões de suínos. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(7):621-625. Laboratório de Microbiologia e Biologia Molecular, Universidade Federal do Mato Grosso, Av. Fernando Corrêa da Costa2367, Bairro Boa Esperança, Cuiabá, MT 78060-900, Brazil. E-mail: valdutra@ufmt.br Based on diagnostic tests for the detection of nucleic acids without amplification through the use of gold nanoparticles (AuNPs) have been described for various diseases. This study aimed to develop a technique of unmodified AuNPs to detect Actinobacillus pleuropneumoniae (App). We used 70 lung samples from pigs, 17 with and 53 without characteristic lesions of pneumonia, to detect App. The primer used was based on ApxIV gene. The AuNPs test had a sensitivity of 93.8% and specificity of 84.6% when compared with PCR detection. The results showed good agreement between AuNPs and PCR testing, and the technique can be used as an alternative to conventional tests, since it is quick and easy, and does not require implementation infrastructure and skilled labor.INDEX TERMS: Swine pneumonia, gold nanoparticle, AuNP, Actinobacillus pleuropneumoniae. (Rossi et al. 2013). São consideradas doenças multifatoriais, provocando significativas perdas econômicas, geralmente associadas à produção intensiva, a fatores ambientais e de manejo (Hansen et al. 2010, Opriessnig, Gimenez-Lirola & Halbur 2011. O diagnóstico baseia-se no isolamento do agente a partir de lesões suspeitas e, principalmente, em testes sorológicos para estabelecimento de medidas de controle (Coelho et al. 2004, Xie et al. 2013.A pleuropneumonia suína (PPS) causada pela bactéria Actinobacillus pleuropneumoniae (App), provoca doença clí-nica caracterizada por pneumonia com pleurisia fibrinosa, lesões pulmonares necrohemorrágicas, adesões pleurais fibrinóticas e, em casos severos, à morte (Bossé et al. 2002). O contágio geralmente ocorre após inalação de aerossóis ou contato direto, o microrganismo inalado coloniza o tecido pulmonar aderindo-se ao muco, proteínas e a células hospedeiras com posterior multiplicação no local (Chiers et al. 2010). O monitoramento do status da doença em rebanhos, o controle e a erradicação são de fundamental importância devido a características de contágio rápido deste agente, para impedir que animais portadores sejam introduzidos em rebanhos saudáveis (Tremblay et al. 2013).Testes indiretos são muito utilizados (Machado et al. 2001, Shin et al. 2011, Eamens et al. 2012a,b, GimenezLirola et al. 2014,para detecção simultânea de anticorpos para toxinas com sensibilidade de 82,7% e especificidade de 100% (Gimenez-Lirola et al. 2014). São descritos testes de ELISA monovalentes e polivalentes para sorotipos, com sensibilidade e especificidade variando de 88,3% a 96,6% (Machado et al. 2001). A importância de alta sensibilidade e especific...

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Padronização da técnica de nanopartícula de ouro não modificada (AuNPs) para detecção de Actinobacillus pleuropneumoniae em pulmões de suínos

et al. 2014

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Pathogenic variability among Pasteurella multocida type A isolates from Brazilian pig farms

et al. 2018

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BackgroundPasteurella multocida type A (PmA) is considered a secondary agent of pneumonia in pigs. The role of PmA as a primary pathogen was investigated by challenging pigs with eight field strains isolated from pneumonia and serositis in six Brazilian states. Eight groups of eight pigs each were intranasally inoculated with different strains of PmA (1.5 mL/nostril of 10e7 CFU/mL). The control group (n = 12) received sterile PBS. The pigs were euthanized by electrocution and necropsied by 5 dpi. Macroscopic lesions were recorded, and swabs and fragments of thoracic and abdominal organs were analyzed by bacteriological and pathological assays. The PmA strains were analyzed for four virulence genes (toxA: toxin; pfhA: adhesion; tbpA and hgbB: iron acquisition) by PCR and sequencing and submitted to multilocus sequence typing (MLST).ResultsThe eight PmA strains were classified as follows: five as highly pathogenic (HP) for causing necrotic bronchopneumonia and diffuse fibrinous pleuritis and pericarditis; one as low pathogenic for causing only focal bronchopneumonia; and two as nonpathogenic because they did not cause injury to any pig. PCR for the gene pfhA was positive for all five HP isolates. Sequencing demonstrated that the pfhA region of the HP strains comprised four genes: tpsB1, pfhA1, tpsB2 and pfhA2. The low and nonpathogenic strains did not contain the genes tpsB2 and pfhA2. A deletion of four bases was observed in the pfhA gene in the low pathogenic strain, and an insertion of 37 kb of phage DNA was observed in the nonpathogenic strains. MLST clustered the HP isolates in one group and the low and nonpathogenic isolates in another. Only the nonpathogenic isolates matched sequence type 10; the other isolates did not match any type available in the MLST database.ConclusionsThe hypothesis that some PmA strains are primary pathogens and cause disease in pigs without any co-factor was confirmed. The pfhA region, comprising the genes tpsB1, tpsB2, pfhA1 and pfhA2, is related to the pathogenicity of PmA. The HP strains can cause necrotic bronchopneumonia, fibrinous pleuritis and pericarditis in pigs and can be identified by PCR amplification of the gene pfhA2.

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Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) baseada no gene cpx para detecção de Actinobacillus pleuropneumoniae em suínos natural e experimentalmente infectados

Abstract: A pleuropneumonia suína é uma das mais importantes doenças respiratórias dos suínos, estando presente em todos os países produtores. Para o controle e o monitoramento da pleuropneumonia, é necessário

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Padronização da técnica de nanopartícula de ouro não modificada (AuNPs) para detecção de Actinobacillus pleuropneumoniae em pulmões de suínos

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