Quantitative plasma/serum EBV DNA load by LMP2A determination in an Italian cohort of NPC patients

Diagnostic Value of Measuring Epstein-Barr Virus (EBV) DNA Load and Carcinoma-Specific Viral mRNA in Relation to Anti-EBV Immunoglobulin A (IgA) and IgG Antibody Levels in Blood of Nasopharyngeal Carcinoma Patients from Indonesia

“…In general, the significantly higher whole-blood EBV DNA loads in these NPC patients compared to those in healthy EBV carriers (43,55,56,63) confirm the findings for Chinese, Thai, Italian, and Taiwanese NPC patients (10,38,41,47,48,60,66). Still, about 15% of the whole-blood samples from our patients were EBV DNA negative, while the load in an even larger fraction (40%) was below the 2,000-copy/ml clinical cutoff value previously determined to be the upper limit in healthy EBV carriers (54,55).…”

Valutazione analitica e applicazione clinica di un metodo Real Time PCR per il dosaggio della carica virale di Epstein-Barr virus

“…In presenza di aumento significativo di IgG anti-EA (2 o 3+) insieme a positività di IgG anti-EBNA-1 c'è indicazione di possibile riattivazione di EBV. Quantificazione del DNA di EBV Il metodo di QC-PCR, già descritto dettagliatamente (15), si basa sulla coamplificazione del DNA dei campioni con diluizioni seriali a titolo noto di un competitore standard, contenente la stessa sequenza di riconoscimento dei primer del campione, un frammento della regione LMP-2A con una delezione interna di 28 basi (Diatech, Italia). L'interpretazione dei risultati è stata effettuata mediante risoluzione di 20 µl di ciascun prodotto di PCR dopo elettroforesi su gel di poliacrilammide e lettura dell'intensità relativa della fluorescenza dei frammenti colorati con etidio bromuro mediante densitometro (QuantityOne, BIORAD).…”

“…La maggior parte dei metodi si basa sul dosaggio del DNA virale nel sangue periferico, in quanto il genoma virale in questo fluido biologico, presente sia in forma virus-associata che episomale, è indice di riattivazione virale ed il campionamento è poco invasivo (21). I metodi tradizionali, ancora utilizzati in alcuni laboratori, comprendono la crescita in vitro di linfociti B EBVinfetti (19), l'ibridizzazione in situ utilizzando sonde di piccoli RNA di EBV (EBER) (11) e la PCR quantitativa competitiva (QC-PCR) (1,15,16,18,27). Diversi lavori più recenti hanno applicato una tecnica di quantificazione assoluta del DNA di EBV, basata sulla PCR in tempo reale (Real Time PCR) (6,26).…”

“…Diversi lavori più recenti hanno applicato una tecnica di quantificazione assoluta del DNA di EBV, basata sulla PCR in tempo reale (Real Time PCR) (6,26). Lo scopo di questo studio è stato quello di valutare la "performance" analitica di un metodo Real Time PCR per la determinazione del DNA di EBV e confrontarlo con un metodo tradizionale di QC-PCR, da noi precedentemente utilizzato (15), applicandolo a campioni di siero di pazienti con IM e UCNT. Allo scopo infine di valutare il rischio di una riattivazione da EBV in pazienti gravemente immunocompromessi, lo stesso sistema è stato applicato allo studio di pazienti con infezione da HIV che hanno sviluppato linfomi, trattati con chemioterapia ad alte dosi (HCT) e trapianto autologo di cellule staminali emopoietiche del sangue periferico (PBSCT).…”

“…lazione tra riattivazione sierologica e viremia EBV, il nostro dato è in linea con quanto descritto in letteratura (15). Dati recenti suggeriscono, però, l'utilità di associare marcatori sierologici e molecolari per valutare il rischio di linfoproliferazione post-trapianto nei trapiantati (3).…”