Quantitative, immunologische Bestimmungsmethode für Rubredoxin in Bakterienrohextrakten von Acinetobacter calcoaceticus

Abstract

Die quantitative Bestimmung des Rubredoxingehaltes in Bakterienrohextrakten von Acinetobacter calcoaceticus erfolgte mit Hilfe einer immunologischen Methode. Da diskelektrophoretisch homogenes, natives Rubredoxin bei Kaninchen keine humorale Immunantwort hervorruft, wurde die Immunogenitiit des Antigens durch Vernetzen mit Glutaraldehyd erhoht. Die gegen vernetztes Rubredoxin in Kaninchen gebildeten Antikorper priizipitieren sowohl das vernetzte als auch das native Rubredoxin. Eine geringe Reaktion zeigte das gewonnene Antiserum auch gegenuber Ferredoxin aue Spinatbliittern. Hingegen iet mit Adrenodoxin aus Nebennierenmitochondrien keine Prazipitation zu beobachten. Die durch Rubredoxin-Reductase BUS Ac. calcoaceticus katalysierte Rubredoxin-abhiingige Reduktion von Cytochrom c wird durch das gewonnene Antiserum gehemmt.Zur quantitativen Bestimmung von Rubredoxin in Zellrohextrakten konnte ein Radioimmuntest mit einer Nachweisgrenze bei 0,02 nmol Rubredoxin/ml Probe aufgebaut werden. Der Rubredoxingehalt in Rohextrakten von Ac. culcoaceticua betragt nach Wachstum auf n-Alkanen 4 lo-" mol/mg Bakterienprotein.