Quantificação sérica de vitamina C por CLAE-UV e estudo de estabilidade

Abstract

Recebido em 13/4/11; aceito em 4/7/11; publicado na web em 19/8/11 SERUM QUANTIFICATION OF VITAMIN C BY HPLC-UV AND STABILITY STUDY. Vitamin C, an exogenous antioxidant, is essential to human health. In this study, a method was validated to serum vitamin C quantification by HPLC-UV. Its stability with and without the use of tris [2-carboxy-ethyl] phosphine hydrochloride (TCEP), at -20 and -80 °C, in serum and supernatant were also evaluated. Analysis showed r 2 > 0.99, precision CV% < 15% and % bias < 15%, being linear, precise and accurate. The stability test revealed that using TCEP in serum storage at -20 and -80 °C or in supernatant at -80 °C the vitamin C levels remain stable for 30 and 12 days, respectively. Keywords: HPLC; vitamin C; stability. INTRODUÇÃOA vitamina C (L-ácido ascórbico) é um dos nutrientes hidrossolúveis mais importantes da dieta humana, 1 pois esta substância não é sintetizada pelo organismo do homem devido à ausência da enzima L-gulonolactona oxidase, a qual catalisa a etapa final da síntese de ácido ascórbico. 2,3 Diante da incapacidade de síntese endógena de vitamina C, o organismo adquire esta substância através da dieta ou de suplementos vitamínicos. [4][5][6] Os efeitos benéficos da vitamina C em humanos ocorrem devido a sua cofunção em processos enzimáticos 7,8 e atividade antioxidante através da captura de ânions superóxido (-O 2 . ) para formação do radical semideidroascorbato, o qual é reduzido pela glutationa reduzida (GSH). 9,10 Já foi verificado que as concentrações de vitamina C no sangue são positivamente relacionadas à saúde, e inversamente com morbidade e mortalidade, pois esta vitamina está associada positivamente com os níveis de colesterol c-HDL 11 e hemoglobina, 5,7 além de contribuir com a regeneração da vitamina E oxidada, predizer o risco de acidente vascular cerebral, 12 auxiliar na terapia da diálise 13 e prevenir complicações gestacionais. 14,15 Isso demonstra que a vitamina C pode ser um biomarcador tanto do estado de saúde, como também do status nutricional de um indivíduo. 5,7,[15][16][17][18][19] Entretanto, baixas ou elevadas concentrações desta vitamina no organismo apresentam ações oxidantes. [20][21][22] Diante disso, a quantificação de níveis circulantes de vitamina C também é considerada um biomarcador do estresse oxidativo em humanos. 18,[23][24][25][26] Existem vários métodos para a quantificação dos níveis de vitamina C sanguíneos. [27][28][29][30][31][32] Os métodos espectrofotométricos são baseados na derivatização da vitamina C ou no seu caráter redutor, apresentando como vantagens o seu baixo custo e rapidez de análise. [33][34][35] Porém outras substâncias presentes em amostras biológicas, tais como íons de ferro ou cobre, açúcares ou ácido glicurônico, citrato e peróxido de hidrogênio, podem interferir significativamente na sua quantificação. 36 Nesse sentido, o método padrão para quantificar a vitamina C é a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), pois se trata de uma técnica mais sensível e específica que os métodos espectrof...

Relationship between Inflammation and Oxidative Stress and Cognitive Decline in the Institutionalized Elderly

“…Serum vitamin C was analyzed according to the method of Baierle et al (2012) [ 25 ]. Vitamin C levels were assessed by HPLC with ultraviolet detection (UV) using tris[2-carboxy-ethyl] phosphine hydrochloride (TCEP) as a reducing agent.…”

“…Vitamin C levels were assessed by HPLC with ultraviolet detection (UV) using tris[2-carboxy-ethyl] phosphine hydrochloride (TCEP) as a reducing agent. After deproteinization of the sample with perchloric acid 10% (v/v), the supernatant obtained after centrifugation was injected into the chromatograph [ 25 ]. Vitamin C concentrations were expressed as mg L −1 .…”