Protocol for the High-quality Plasmid Isolation from Different Recalcitrant Bacterial Species: &lt;em&gt;Agrobacterium&lt;/em&gt; spp., &lt;em&gt;Rhizobium&lt;/em&gt; sp., and &lt;em&gt;Bacillus thuringiensis&lt;/em&gt;

Kodackattumannil, Preshobha; Sasi, Shina; Krishnan, Saranya; Lekshmi, Geetha; Kottackal, Martin; Amiri, Khaled M. A.

doi:10.21769/bioprotoc.4788

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“…4B), obteniendo una integridad y concentración adecuada, confirmando una muestra libre de contaminantes. Kodackattumannil, P., et al;, argumentan que la extracción por kit comercial añade elementos como las RNAsas, que permiten la obtención de muestras de alta calidad y pureza, por el contrario, los métodos caseros arrojan muestras de ADN contaminadas con residuos que pueden alterar los procesos posteriores a la clonación. Una de las premisas para la confirmación de la inserción de fragmentos en plásmidos de clonación es la secuenciación de estos, por lo cual el gen csrA insertado en el plásmido pAmeA fue secuenciado.…”

Section: Confirmación Del Plásmido Pameaunclassified

Construcción en Escherichia coli del Plásmido pAmeA2 que Contiene el Gen csrA de Bacillus licheniformis M2-7

Rojas Aparicio,

Bello Mendoza,

Hernández Eligio

et al. 2024

Ciencia Latina

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Actualmente el uso de los hidrocarburos aromáticos policíclicos se ha asociado a la contaminación de la flora y fauna, repercutiendo sobre la salud humana. Para corregir esta problemática, se han desarrollado métodos de biorremediación basados en la aplicación de microorganismos capaces de restaurar ambientes contaminados con este tipo de hidrocarburos. Uno de los modelos bacterianos utilizados es la cepa de Bacillus licheniformis M2-7, que tiene la capacidad de degradar HAPs. Esto lo lleva a cabo a partir del sistema Csr, que contiene el gen csrA que codifica para la proteína CsrA, asociada a la motilidad y capacidad de utilizar hidrocarburos como fuente de carbono. La presente investigación tuvo como objetivo la construcción del plásmido que contiene el gen csrA de B. licheniformis M2-7. Para ello se caracterizó in silico el gen csrA, se realizó la extracción del ADN de B. licheniformis M2-7 y la amplificación del gen csrA por PCR. El gen fue clonado en el vector pJET1.2/Blunt para la construcción del plásmido. Se transformaron y seleccionaron a las cepas de E. coli, para posteriormente confirmar la presencia de csrA por PCR, digestión enzimática y secuenciación. Se logró construir y confirmar la presencia del plásmido pAmeA2.

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Section: Confirmación Del Plásmido Pameaunclassified