Prolactin-induced changes in protein expression in human pancreatic islets

Labriola, Letícia; Gb, Ferreira; Wr, Montor; Ma, Demasi; Pimenta, Daniel C.; Fh, Lojudice; Genzini, Tércio; Goldberg, Anna Carla; Fg, Eliaschewitz; Sogayar, Mari Cleide

doi:10.1016/j.mce.2006.10.004

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“…De fato, acredita-se que os membros anti-apoptóticos da família BCL2 interagem com o VDAC, fechando-o e então, inibindo a liberação de citocromo c e a subseqüente ativação do apoptosomo, um complexo formado por caspase-9, citocromo c e o APAF1 Narita et al, 1999). Relacionado a este fenômeno, resultados prévios do nosso laboratório já haviam mostrado um aumento na forma acídica (fechada) dessa proteína após o tratamento com rhPRL em células-beta humanas Ferreira et al, 2007).…”

Section: Discussionunclassified

“…Os resultados apresentados aqui estão de acordo com os de Jensen e colaboradores, visto que não foi observado efeito algum nos níveis de produção do óxido nítrico em ilhotas humanas sob o tratamento de rhPRL, quando comparadas com a situação controle. É digno de nota que resultados prévios do nosso laboratório mostraram um aumento dos níveis proteicos de aconitase mitocrondrial em culturas primárias de ilhotas humanas tratadas com rhPRL, dando a entender que rhPRL pode estar restaurando a fosforilação oxidativa prejudicada pelo NO Ferreira et al, 2007). Da mesma forma, recentemente foi demonstrado que a adição de rhPRL a culturas de ilhotas humanas confere um efeito citoprotetor a células tratadas com S-nitroso-N-acetyl-DL-penicillamine, um doador sintético de NO Mita et al, 2010).…”

Section: Discussionunclassified

“…Apesar de não haver atualmente descrição direta alguma da prolactina agindo como um inibidor de estresse de retículo em células-beta, resultados prévios do nosso laboratório mostraram que o tratamento com rhPRL aumenta os níveis de três proteínas envolvidas com o funcionamento de chaperonas e/ou dobramento de proteínas, sendo elas: serpina H2, heat shock protein 27 e glucose-related protein Ferreira et al, 2007). Estes resultados, em conjunto, sugerem que a produção destas proteínas induzidas por rhPRL poderia estar associada com a sobrevivência celular, por interferir com o estresse de retículo.…”

Section: Discussionunclassified

“…Secreção de insulina induzida por glicose (índice de estimulação)* Giannella et al, 2004;Ferreira et al, 2007).…”

Section: Linhagens Celulares Humanas Derivadas De Insulinomas Humanosunclassified

“…Quando as culturas atingiram 90% de confluência, as células foram destacadas com solução contendo 0,025% de tripsina e 1 mM de ácido etilenodiamino tetra-acético (EDTA), lavadas e ressuspendidas em meio fresco. Estas culturas apresentam cerca de 85% Giannella et al, 2004;Ferreira et al, 2007). …”

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Mecanismos moleculares envolvidos em citoproteção e transformação maligna de células-beta pancreáticas

Terra¹

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Mecanismos moleculares envolvidos em citoproteção e transformação maligna de células-beta pancreáticasT e r r a , Le tíc ia F e r r ei r a T 3 2 3 m M e c a n i s m o s m o l e c u l a r e s e n v o l v i d o s e m c i t o p r o t e ç ã o e tr a nsfor maç ã o ma ligna de c é l u l a s -b e t a p anc r e á tic a s / Le tí ci a F er r e ir a T e r r a . --Sã o P aulo , 2 0 13 . 1 9 4p .T ese ( do utor a d o ) -I nstituto d e Químic a d a Unive r sid a d e de S ão P a ulo . De pa r ta me nto de B io químic a .Or i enta d or : So ga ya r , Ma r i Cle id e . C o-o r ie nta do r : La b r iol a, Le tíc ia .1 . B io lo gia c e lula r 2 . Ca nc e r 3. Ap op to se : P a tol ogia 4 . Dia b e te s M el litus I . T . I I . S oga ya r , M ar i Cle id e , o r ie nta do r . I I I . La b r io la , Letí ci a, o r ie nta d o r . AgradecimentosÀ Profa. Dra. Mari C. Sogayar, pela orientação e por todo o apoio. Pelos conselhos, sugestões e críticas, sempre mostrando sua opinião em todos os assuntos. Por ter aberto as portas do laboratório para mim oito anos atrás e me introduzido ao fantástico mundo da ciência, favorecendo meu amadurecimento de incontáveis formas. Obrigada ainda por permitir que o laboratório possua o ambiente agradável e receptivo que apresenta, fazendo dele nossa segunda casa. À Profa. Dra. Leticia Labriola, pela co-orientação desta tese. Por ter me orientado no meu trabalho de conclusão de curso na faculdade, pelas discussões e sugestões.Sinto-me feliz em ter podido presenciar e fazer parte, mesmo que pequena, da evolução de sua carreira. Obrigada por me acalmar em todos os momentos que tudo que precisamos é uma palavra amiga, principalmente quando um resultado importante dá errado, um artigo retorna ou uma bolsa é recusada.Ao Prof. Dr. Décio L. Eizirik e à Dra. Alessandra K. Cardozo, por terem me recebido em seu laboratório na Université Libre de Bruxelles, por toda a preocupação, conversas e ajuda que me forneceram durante os seis meses que fiquei por lá, pelo contato que mantivemos e ainda mantemos desde minha volta, por me mostrarem a ciência do outro lado do mundo, por terem me apresentado a inúmeras pessoas que com certeza serão importantes em algum momento no meu futuro e por terem me levado a diversos seminários e reuniões que abriram ainda mais a minha mente. À Alessandra pela supervisão e pelas discussões constantes, conseguindo tornar o meu dia-a-dia o mais produtivo que ele poderia ser. Ao Décio pelos conselhos, recomendações e sugestões, não somente sobre o tempo que passei com eles, como também sobre meu futuro, penso nisso constantemente.Obrigada a ambos por me fazerem sentir como se sempre tivesse sido parte do Laboratory of Experimental Medicine, e por fazer dele um lugar para onde eu sempre poderei voltar.Aos meus colaboradores do INCOR, Prof. Dr. Edécio C. Neto, por permitir a realização de parte deste trabalho em seu laboratório e disponibilizar seus aparelhos para minha utilização; e à Dra. Priscila C. Teixeira, por me ensinar tudo relacionado ao 2D-DIGE, da técnica à análise de resultados. À...

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Section: Discussionunclassified

“…Secreção de insulina induzida por glicose (índice de estimulação)* Giannella et al, 2004;Ferreira et al, 2007).…”

Section: Linhagens Celulares Humanas Derivadas De Insulinomas Humanosunclassified

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Mecanismos moleculares envolvidos em citoproteção e transformação maligna de células-beta pancreáticas

Terra¹

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Recombinant human prolactin promotes human beta cell survival via inhibition of extrinsic and intrinsic apoptosis pathways

et al. 2011

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Aims/hypothesis Transplantation of pancreatic islets constitutes a promising alternative treatment for type 1 diabetes. However, it is limited by the shortage of organ donors. Previous results from our laboratory have demonstrated beneficial effects of recombinant human prolactin (rhPRL) treatment on beta cell cultures. We therefore investigated the role of rhPRL action in human beta cell survival, focusing on the molecular mechanisms involved in this process. Methods Human pancreatic islets were isolated using an automated method. Islet cultures were pre-treated in the absence or presence of rhPRL and then subjected to serum starvation or cytokine treatment. Beta cells were labelled with Newport green and apoptosis was evaluated using flow cytometry analysis. Levels of BCL2 gene family members were studied by quantitative RT-PCR and western blot. Caspase-8, -9 and -3 activity, as well as nitric oxide production, were evaluated by fluorimetric assays. ResultsThe proportion of apoptotic beta cells was significantly lowered in the presence of rhPRL under both cell death-induced conditions. We also demonstrated that cytoprotection may involve an increase of BCL2/BAX ratio, as well as inhibition of caspase-8, -9 and -3. Conclusions/interpretation Our study provides relevant evidence for a protective effect of lactogens on human beta cell apoptosis. The results also suggest that the improvement of cell survival may involve, at least in part, inhibition of cell death pathways controlled by the BCL2 gene family members. These findings are highly relevant for improvement of the islet isolation procedure and for clinical islet transplantation.

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NUCEL (Cell and Molecular Therapy Center): A Multidisciplinary Center for Translational Research in Brazil

et al. 2008

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Social and economical development is closely associated with technological innovation and a well-developed biotechnological industry. In the last few years, Brazil's scientific production has been steadily increasing; however, the number of patents is lagging behind, with technological and translational research requiring governmental incentive and reinforcement. The Cell and Molecular Therapy Center (NUCEL) was created to develop activities in the translational research field, addressing concrete problems found in biomedical and veterinary areas and actively searching for solutions by employing a genetic engineering approach to generate cell lines over-expressing recombinant proteins to be transferred to local biotech companies, aiming at furthering the development of a national competence for local production of biopharmaceuticals of widespread use and of life-saving importance. To this end, mammalian cell engineering technologies were used to generate cell lines over-expressing several different recombinant proteins of biomedical and biotechnological interest, namely, recombinant human Amylin/IAPP for diabetes treatment, human FVIII and FIX clotting factors for hemophilia, human and bovine FSH for fertility and reproduction, and human bone repair proteins (BMPs). Expression of some of these proteins is also being sought with the baculovirus/insect cell system (BEVS) which, in many cases, is able to deliver high-yield production of recombinant proteins with biological activity comparable to that of mammalian systems, but in a much more cost-effective manner. Transfer of some of these recombinant products to local Biotech companies has been pursued by taking advantage of the São Paulo State Foundation (FAPESP) and Federal Government (FINEP, CNPq) incentives for joint Research Development and Innovation partnership projects.

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Prolactin-induced changes in protein expression in human pancreatic islets

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Mecanismos moleculares envolvidos em citoproteção e transformação maligna de células-beta pancreáticas

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Recombinant human prolactin promotes human beta cell survival via inhibition of extrinsic and intrinsic apoptosis pathways

NUCEL (Cell and Molecular Therapy Center): A Multidisciplinary Center for Translational Research in Brazil

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