Justificativa e Objetivos: A hepatite B constitui um dos mais importantes problemas de saúde pública mundial. A contaminação pode acontecer em qualquer individuo, contudo os profissionais da saúde, em especial os da área de enfermagem, estão mais expostos. A hepatite B é uma doença ocupacional que possui forma de prevenção acessível, gratuita e obrigatória a todos os profissionais da área de saúde por meio da vacinação. Assim, o presente estudo teve como objetivo verificar o estado vacinal e o conhecimento prévio sobre os riscos de contaminação pelo vírus da hepatite B (HBV) e a adoção de medidas de biossegurança para evitar esses riscos pelos profissionais de enfermagem. Métodos: estudo transversal, realizado com profissionais de enfermagem em um hospital público do interior paulista, por meio da aplicação de um questionário. Dos 107 profissionais da enfermagem da instituição, 96 (89,8%) aceitaram participar da pesquisa no período de janeiro a março de 2015. Resultados: dos participantes, 84,3% apresentavam vacinação completa, 3,2% incompleta e 12,5% desconheciam seu estado vacinal. Mais de 90,0% conheciam as formas de transmissão do HVB, um número significativo de profissionais de enfermagem havia recebido orientações sobre as medidas de biossegurança e descarte de resíduos; porém apenas 81,2% utilizavam equipamento de proteção individual (EPI) em suas atividades. Conclusão: Os resultados indicam que alguns profissionais estariam expostos ao risco de contrair hepatite B, sendo necessário sensibilizar e conscientizar sobre a importância da adoção de práticas seguras e imunização.