Photoincorporation of Tetracycline into Rat‐Liver Ribosomes and Subunits

Abstract

[3H]Tetracycline was covalently incorporated into rat liver ribosomes and isolated 40‐S and 60‐S subunits on irradiation at 254 nm. The antibiotic was almost exclusively incorporated into ribosomal proteins. At least some of these proteins are assumed to be involved in ribosomal function, since photoincorporated tetracycline was found to inhibit the activity of 40‐S and 60‐S subunits in the poly(U)‐directed protein‐synthesizing system as well as that of the 40‐S subunit in the poly(U)‐mediated [14C]Phe‐tRNA binding. The results from simultaneous one‐dimensional and two‐dimensional gel electrophoreses showed a small distribution of label among ribosomal proteins in 60‐S subunits and in 80‐S ribosomes, L10 being the most radioactive protein. As non‐acylated tRNA partly competed with this labeling, it is likely that tetracycline interaction with these proteins occurred at a functional site. L10 has already been found to interact with puromycin [Reboud, A. M., Dubost, S., Buisson, M. & Reboud, J. P. (1981) Biochemistry, 20, 5281–5288]. In the case of free 40‐S subunits the label distribution was wider among ribosomal proteins. No particular role has yet been found for the most labeled protein, S12, but protein S3a, which was also highly labeled, has already been reported to be involved in subunit function.

Antibiotic drugs targeting bacterial RNAs

“…A strong binding site exists on the 30S subunit and a lot of weaker sites on the 30S and 50S subunits 59 , 60 , 61 . Tetracycline may incorporate mainly into ribosomal proteins 62 , 63 since, in the absence of ribonucleoprotein, 16S RNA and the proteins S3, S7, S8, S14 and S19 show high affinity for tetracycline 64 particularly S7 60 . In addition, using a photoreactive benzophenone derivative of tRNA [3-(4-benzoylphenyl)propionyl-phenylalanine transfer RNA (BP-Phe-tRNA)], the photoreaction of 23S RNA was completely inhibited by tetracycline and tetracycline itself interacted efficiently with the loop V region of 23S RNA 65 , 66 .…”

Μελετες Επι Της Πεπτιδυλοτρανσφερασης Σε Συστημα Απο Δικτυοερυθροκυτταρα Κουνελιου

“…Οι πρωτεΐνες L32/33 οι οποίες ιχνηθετούνται παρουσία του αντιδραστηρίου PNPC-Phe-tRNA (π-νιτρο-φαινο-ξυκαρ6ονυλο-[ 3 Η]-ΡΙιβ-ίΡΝΑ), το οποίο προσδένεται κατά πάσα πιθανότητα και στην Ρ-και στην Α-θέση (Czernilofsky et al 1977), έχουν τοποθετηθεί στο μοντέλο των Fabijanski και Pellegrini (1981) κοντά και στις δύο θέσεις πρόσδεσης των tRNAS. Στην ίδια περιοχή είναι πιθανόν να ευρίσκεται και η ριβοσωματική πρωτεΐνη L10 διότι, αφ' ενός μεν εντοπίζεται στη θέση φωτοενσωμάτωσης της [ 3 Η]τετρακυκλίνης (Reboud et al 1982) και ιχνηθετείται παρουσία ραδιενεργού τροποποιημένης πουρομυκίνης {Ν- (2-νιτρο-4-αζι-δο6ενζοϋλο)-πουρομυκίνη} (Böhm et al 1979) και μη τροποποιημένης πουρο μυκίνης (Reboud et al 1981), αφ' ετέρου δε φωτοαντιδρά με το προσδεδεμένο στην Ρ-θέση αποακυλιωμένο [ 32 P]-tRNA (Reboud et al 1982), ανιχνεύεται με υποκατεστημένα παράγωγα του άμινοάκυλο-tRNA (Czerni lofsky et al 1977) και ιχνηθετείται παρουσία του πεντανουκλεοτιδίου C-A-C-C-A(Ac-[ 3 H]Leu). Το πεντανουκλεοτίδιο αυτό προέρχεται από το 3' άκρο του N-Ac-Leu-tRNA και έχει αποδειχθεί ότι προσδένεται στην Ρ-θέση του ριβοσώματος.…”