Ovarian Tissue Preservation after Various Cryopreservation Modes with the Help of DMSO

Abstract

В данной работе был проведен сравнительный морфологический и биохимический анализ сохран-ности овариальной ткани при криоконсервирова-нии под защитой ДМСО в зависимости от концен-трации криопротектора и режима охлаждения.Установлено снижение количества нормаль-ных фолликулов на 20-30% на этапе инкубации после замораживания под защитой 3,0 М ДМСО (режим замораживания без инициации кристалло-образования), что обусловлено наличием латент-ных повреждений в структуре овариальной ткани в виду токсического действия данного криопротекто-ра. При использовании 1,5 М ДМСО независимо от режима замораживания (с и без инициации кри-сталлообразования) таковые повреждения отсут-ствовали, как после удаления криопротектора, так и последующей инкубации ткани. Это связано с равномерным проникновением ДМСО при 22°C по всему объему ткани, которое уменьшало действие механического фактора в процессе кристаллиза-ции. Полученные результаты свидетельствуют о том, что конечная концентрация ДМСО определя-ет степень повреждения структуры овариальной ткани в зависимости от режима замораживания-оттаивания. Следовательно, при криоконсервиро-вании овариальной ткани необходимо осуществ-лять подбор режима охлаждения в зависимости от типа и конечной концентрации криопротектора.Ключевые слова: криоконсервирование, ова-риальная ткань, ДМСО, нормальные фолликулы, ТБК-активные продукты.Связь работы с научными программами, планами, темами. Данная работа выполнялась в рамках государственных бюджетных тем ИПКиК НАН Украины «Свойства криоконсервированных первичных культур клеток эндокринных желез не-онатальных животных in vitro и in vivo при транс-плантации», шифр 2.2.6.104, № гос. регистрации 0116U003494.Введение. Криоконсервирование биологиче-ских объектов представляет собой многоэтапный процесс, который включает первоначальную экс-позицию клеток и тканей в растворах, содержащих криопротектор (КП), охлаждение до отрицательных температур, хранение, отогрев, и, наконец, удале-ние криопротектора. Сложность криоконсервиро-вания овариальной ткани связана с наличием плотных межклеточных контактов в структуре тка-ни, что приводит к неравномерной динамике про-никновения КП, аккумуляции жидкости в межкле-точном пространстве, объемным изменениям со-матических клеток и ооцита [15]. Для фрагментов овариальной ткани подбор композиционного соста-ва среды инкубации, типа и конечной концентра-ции КП осуществляется эмпирически на основании экспериментальных данных, полученных для ооци-тов и эмбрионов [8].В работах [3,14] показано, что при использова-нии существующих протоколов криоконсервирова-ния сохраняется целостность примордиальных фолликулов, тогда как строма овариальной ткани значительно повреждается кристаллами льда [1]. Предполагается, что уменьшение повреждающего действия механического фактора может быть дос-тигнуто за счет комплексного подхода: оптимиза-ции концентрации и типа криопротектора [3,14] в сочетании с эффективным режимом заморажи-вания.Цель работы. Исследовать сохранность фол-ликулов и динамику накопления ТБК-активных про-дуктов во фрагментах овариал...