Otimização do ensaio de azul cresil brilhante visando à seleção qualitativa de oócitos bovinos derivados de ovários submetidos a diferentes temperaturas e tempos de transporte

Abstract

O sucesso da produção in vitro de embriões (PIVE) depende da qualidade de oócitos imaturos, os quais são normalmente selecionados de acordo com a morfologia oocitária. Contudo, esse método é subjetivo e alternativas vem sendo propostas, como o ensaio de azul cresil brilhante (Brillant Cresyl Blue – BCB). Assim, o objetivo foi verificar as condições de incubação do BCB, quanto ao tempo de exposição ao corante (15 vs. 40 vs. 60 vs. 90 min), concentração (15 vs. 20 vs. 26 μM) e diluidor (NaCl vs. PBS vs. DPBS). Adicionalmente, esse ensaio foi empregado para avaliar a qualidade de oócitos colhidos de ovários transportados em diferentes temperaturas (25°C vs. 35°C) e tempos (2 h vs. 10 h). Em todos os experimentos, oócitos recuperados por aspiração folicular foram classificados por critérios morfológicos e, em seguida, incubados com o BCB de acordo com as condições a serem avaliadas. Todos os dados foram analisados pelo teste exato de Fisher (P<0,05), considerando quatro repetições por experimento. Assim, o tempo de exposição, a concentração e o diluidor do BCB que apresentaram as maiores taxas de oócitos viáveis foram 60 min (64,9%) e 90 min (73,4%), 26 μM (59,6%) e PBS (49,2%). Em ambos os ensaios de qualidade oocitária, nenhuma diferença foi observada nas taxas de oócitos viáveis oriundos de ovários transportados em diferentes temperaturas. Embora nenhuma diferença tenha sido observada na qualidade oocitária entre os tempos de transportes de ovários de acordo com os critérios morfológicos, o ensaio de BCB indicou uma redução dessa qualidade de oócitos de ovários transportados por 10 h (51,2%), quando comparado a 2 h (69,6%, P<0,05). Assim, para o ensaio de BCB, foi estabelecido o tempo de incubação de 60 min, na concentração de 26 μM e com o diluidor PBS para a seleção de oócitos bovinos imaturos. Além disso, foram observados melhores resultados com ovários transportados a 35°C até 2 h de transporte.