La acumulación en suelos de petróleo crudo y sus derivados es un problema ambiental grave. La biorremediación es una tecnología de saneamiento de ecosistemas contaminados ampliamente estudiada y aplicada, cuya eficiencia puede estar limitada por la baja solubilidad y toxicidad de los contaminantes. El empleo de biotensioactivos favorece la solubilización de moléculas hidrofóbicas e incrementa la biodisponibilidad. En este trabajo se evaluó la influencia de la bioestimulación con ramnolípidos de Pseudomonas sp. Y3-B1A en la degradación de hidrocarburos a diferentes escalas, determinando a su vez la toxicidad de estas moléculas. En el laboratorio se evaluó la degradación en medio líquido suplementado con crudo e incubado por 28 días. El empleo de ramnolípidos incrementó en 61.7 % el porcentaje de degradación de hidrocarburos totales del petróleo (HTP) con relación al tratamiento sin aditivos. En los microcosmos y parcelas de suelo, se calculó la degradación de HTP, grasas y aceites (GA), compuestos saturados, aromáticos, resinas y asfaltenos a los 30 días. Además, se determinaron las concentraciones de nitrógeno y fósforo, así como el crecimiento microbiano. En los microcosmos la aplicación de ramnolípidos incrementó en más del 40 % la degradación de HTP, compuestos saturados y aromáticos. En las parcelas el incremento de la degradación de HTP y compuestos aromáticos fue de 33 a 34 %, mientras que la de GA alcanzó 86.5 %. La aplicación de ramnolípidos incrementa la biodegradación de hidrocarburos sin provocar efectos tóxicos en el ecosistema.