Optimización de la PCR en punto final y en tiempo real para la detección de Salmonella enterica serotipo Gallinarum en aves de corral de Costa Rica

Abstract

Introducción: La tifosis aviar y la pulorosis, enfermedades ocasionadas por Salmonella enterica subsp. enterica serotipo Gallinarum biotipo Gallinarum y biotipo Pullorum respectivamente, son responsables de una elevada mortalidad en aves de corral generando grandes pérdidas económicas para los avicultores. Objetivo: Fortalecer la detección de los agentes causales de la tifosis aviar y la pulorosis mediante la optimización de técnicas moleculares, tales como la PCR punto final y la PCR tiempo real (qPCR). Métodos: Se emplearon cepas bacterianas control, aislamientos y tejidos de aves de corral infectadas con Salmonella Gallinarum para estandarizar la detección mediante PCR punto final y qPCR. Resultados: Para la PCR punto final se obtuvo una repetibilidad, especificidad y sensibilidad del 100%, y un valor Kappa de 0.98 para la reproducibilidad. Mientras que, con la qPCR se obtuvo una eficiencia del 103% y valores de repetibilidad y reproducibilidad con coeficientes de variación menores al 6%. El límite de detección de ADN genómico fue de 6.4 pg/μL y el del número de células viables de 3x102 UFC/mL para la PCR punto final y de 10 copias de ADN por reacción para la qPCR. Mediante la secuenciación y análisis de los productos de PCR, la topología de taxonomía molecular posicionó a las cepas de este estudio junto con las del serotipo S. Gallinarum, corroborando su identidad. Conclusión: Se logra optimizar una técnica molecular que permite una detección rápida, confiable y sensible de Salmonella Gallinarum/Pullorum, lo cual puede reducir el tiempo de espera para tomar acción en casos de sospecha clínica y posibles brotes.

Isolation, Identification, and Genetic Characterization of Antibiotic Resistance of Salmonella Species Isolated from Chicken Farms

“…chickens are usually divided into three classes based on the diseases they cause [ 12 ]. The first class comprises nonmotile, chicken-adapted Salmonella e, which include S. gallinarum , which causes fowl typhoid, and S. pullorum , which causes pullorum disease in chickens [ 13 ]. Fowl typhoid (FT) and pullorum disease (PD) are septicemic diseases that are usually most significant in growing and adult chickens.…”