O18 Novedoso inmunoensayo multiplex para la detección simultánea y discriminativa de los principales marcadores de autoinmunidad en diabetes mellitus

Abstract

Introducción: los principales marcadores de autoinmunidad en diabetes mellitus tipo 1 (DM1) son los que presentan especificidad hacia: glutamato decarboxilasa (GADA), tirosina fosfatasa 2 asociada a insulinoma (IA-2A) y la isoforma 8 del trasportador de zinc (ZnT8A). Su detección es fundamental como apoyo diagnóstico de DM1 y para establecer la presencia de diabetes autoinmune latente del adulto (LADA) a fin de garantizar el tratamiento adecuado en forma oportuna. El método de referencia para su detección (ensayo de unión a radioligando, RBA) es altamente sensible y específico, pero costoso, contaminante del medio ambiente y su ejecución se limita a centros con infraestructura y personal habilitados por la entidad regulatoria. Por ello, es imprescindible el desarrollo de métodos alternativos que facilite el acceso al diagnóstico a un mayor número de pacientes.Objetivos: desarrollar un inmunoensayo basado en citometría de flujo (CF) para la determinación combinada y discriminativa de los principales marcadores de DM1: GADA, IA-2A y ZnT8A.Materiales y métodos: se ensayaron 10 sueros de pacientes pediátricos con reciente diagnóstico de DM1 y 20 sueros de individuos controles normales (SHN). Se empleó un modelo de doble paratope incubando las muestras con microesferas de poliestireno de 4, 5 y 7 mmadsorbidas con los antígenos recombinantes Trx-GAD, Trx-IA-2 y Trx-ZnT8, respectivamente, y las correspondientes proteínas biotiniladas. Luego de una incubación overnight a 4 ºC, los inmunocomplejos formados se detectaron empleando estreptavidina-ficoeritrina y se adquirió en un citómetro de flujo. Todas las muestras fueron evaluadas en paralelo por RBA.

Expression of a ZnT8/GAD65 chimera in insect cells useful for Autoimmune Diabetes diagnosis

“…Although up to now it has not been possible to attribute a clear role for the humoral immune response in the etiopathogenesis of autoimmune DM, the early detection of the markers IAA/PAA, GADA, IA-2A and ZnT8A makes it possible to support differential diagnosis of the several types of DM, such as Immuno Mediated Autoimmune Diabetes in Adults (Adler et al, 2021;Valdez et al, 2022). A link was found between the number of positive markers in asymptomatic individuals within risk groups (direct relatives of diabetic patients), and the probability of developing the disease over a given period (Achenbach et al, 2007).…”