Die Ligation der sieben Teilsequenzen+zum kompletten 33 Basenpaare umfassenden Doppelstrang einer Angiotensin-11-DNS mit Hilfe von T4 Polynucleotidligase wird beschrieben. Die Ligationsreaktion wird durch einen rnodifizierten Norittest verbunden mit einem Abbau von [y3*P]ATP mit Anorganischer Pyrophosphatase aus Backerhefe verfolgt. Diese neue Analysentechnik macht eine zeitraubende und verlustreiche Reinigung der mit T4 Polynucleotidkinase und [y3*P]ATP phosphorylierten Teilsequenzen uberfliissig und erlaubt es, die DNS-Synthese mehrstufig und ohne Zwischenreinigung durchzufuhren.
Synthesis of a Structural Gene for the Peptide Hormone Angiotensin 11, Part 9l). -Ligation of the Partial Sequences to the Complete DuplexLigation of the seven partial sequences by T4 polynucleotide ligase to give the total duplex of an angiotensin I1 DNA with 33 base pairs is described. The ligation reaction was monitored by a modified Norit assay combined with the degradation of [Y-~'P]ATP by inorganic pyrophosphatase from baker's yeast. This new analytical technique makes it unnecessary to purify the segments after phosphorylation with T4 polynucleotide kinase and [y3'P]ATP by time-consuming and yielddecreasing methods. Moreover, this technique permits the synthesis of double helical DNA in a multiple step reaction without any intermediate purification.
EinleitungNachdem in den voranstehenden Arbeiten (Teile 1 -8 dieser Reihe) die Synthese der sieben Teilsequenzen und deren Sequenzierung beschrieben wurden, wird in dieser Verdffentlichung uber ihre Kopplung zurn totalen Doppelstrang einer DNS fur das Peptidhorrnon Angiotensin I1 (Abbildung 1) berichtet. Eine Kurzmitteilung hieriiber ist bereits erschienen2). Anschlierjend wurde iiber die Synthese der Lactose-Operator-DNS3s4), einer DNS fur den Tyrosin-tRNS-Vorlaidfer aus E. c01i5), uber eine DNS fur Korrespondenz bitte an diesen Autor richten. H. Blocker und H.