Αξ. Γηαηξηβήο 2230 3. ΜΔΘΟΓΟΗ ………………………………………………………………….. 3.1. πζηεκαηηθή ηαμηλφκεζε ησλ θξνηψλσλ ……………………………… 3.2. Οκνγελνπνίεζε ησλ θξνηψλσλ θαη δεηγκάησλ λεθξηθνχ ηζηνχ ησλ ηξσθηηθψλ ……………………………………………………. 3.3. Δθρχιηζε DNA απφ νκνγελνπνηεκέλνπο θξφησλεο θαη δείγκαηα λεθξηθνχ ηζηνχ ηξσθηηθψλ ……………………………………………… 3.4. Δθρχιηζε DNA απφ δείγκαηα νξνχ ………………………………… 3.5. Δθρχιηζε DNA απφ δείγκαηα ζηέινπ ………………………………. 3.6. Μνξηαθέο κέζνδνη ……………………………………………………… 3.6.1. Πξνζδηνξηζκόο ηεο αληρλεπηηθήο ηθαλόηεηαο ηεο αιπζηδωηήο αληίδξαζεο πνιπκεξάζεο (Polymerase Chain Reaction, PCR) ……. 3.6.2. Φωιηαζκέλε αιπζηδωηή αληίδξαζε πνιπκεξάζεο (nested PCR) γηα ην γνλίδην βιεθαξίδαο fla ηνπ βαθηεξηαθνύ ρξωκνζώκαηνο ηεο Borrelia burgdorferi. ………………………………………….. 3.6.3. Αιπζηδωηή αληίδξαζε πνιπκεξάζεο (PCR) γηα ην γνλίδην ηνπ ξηβνζωκηθνύ rDNA 16S (16S rDNA) ………………… 3.7. Μέζνδνη αλίρλεπζεο εηδηθψλ αληηζσκάησλ έλαληη ηεο Borrelia burgdorferi sensu lato ………………………………………… 3.7.1. Αλίρλεπζε αληηζωκάηωλ ζηα δείγκαηα νξώλ αηόκωλ ηνπ γεληθνύ πιεζπζκνύ ………………………………………… 3.7.1.1. Αλνζνελδπκηθέο κέζνδνη (EIA) …………………………. 3.7.1.1.1. Μηθξνζωκαηηδηαθή αλνζνελδπκηθή κέζνδνο γηα ηελ αλίρλεπζε εηδηθώλ IgG θαη IgM αληηζωκάηωλ … 3.7.1.1.2. Αλνζνελδπκηθή δνθηκαζία ELISA (Enzyme-Linked Immuno-Sorbent Assay) ……………… 3.7.1.2. Αλνζναπνηύπωζε ………………………………………. 3.7.1.3. Αλίρλεπζε αληηζωκάηωλ έλαληη ηεο Borrelia burgdorferi ζηνπο αζζελείο κε ζπκπηωκαηνινγία ύπνπηε Lyme κπνξξειίωζεο …………………………………… 98 3.8. ηαηηζηηθή επεμεξγαζία ησλ απνηειεζκάησλ ………………………… 4. ΑΠΟΣΔΛΔΜΑΣΑ ……………………………………………………… 4.1. Απνηειέζκαηα αλίρλεπζεο DNA ζε θξφησλεο, ηξσθηηθά θαη ζίειν αζζελψλ κε παξάιπζε πξνζσπηθνχ λεχξνπ …………………………. 4.1.1. Σπζηεκαηηθή ηαμηλόκεζε θξνηώλωλ ……………………………. 4.1.2. Πξνζδηνξηζκόο ηεο αληρλεπηηθήο ηθαλόηεηαο ηεο PCR ζε νκνγελνπνηεκέλε νκάδα θξνηώλωλ ………………………. 4.1.3. Έιεγρνο ηεο απόδνζεο ηνπ πξωηνθόιινπ PCR γηα ην γνλίδην fla ζε δείγκαηα λεθξηθνύ ηζηνύ ηξωθηηθώλ ………………… 4.1.4. Έιεγρνο ηεο απόδνζεο ηνπ πξωηνθόιινπ PCR γηα ην γνλίδην ηνπ ξηβνζωκηθνύ rDNA 16S (16S rDNA)……………………… 4.1.5. Απνηειέζκαηα ηεο PCR γηα ην γνλίδην fla ζηνπο θξόηωλεο ……………………………………………. 4.1.6. Απνηειέζκαηα ηεο PCR γηα ην γνλίδην ηνπ ξηβνζωκηθνύ rDNA 16S (16S rDNA) ζηνπο θξόηωλεο ………………………….