Morpho-functional characterisation of protective mechanisms of neutrophils in the patients at the terminal stage of chronic kidney disease

Abstract

Резюме. Пациенты с хронической болезнью почек (ХБП) являются уникальной клинической «моделью» для изучения функций иммунокомпетентных клеток в условиях выраженной эндогенной интоксикации, воспаления и иммуносупрессии. Цель работы-комплексная оценка показателей морфофункциональной активности нейтрофилов у пациентов в терминальной стадии хронической почечной недостаточности. Обследовано 49 пациентов с ХБП 5 Д стадии (по классификации K/DOQI, 2006) (16 женщин, 33 мужчины в возрасте от 22 до 63 лет) и 60 практически здоровых лиц (контроль). Материалом для исследования служил лейкоконцентрат венозной крови. Оценивали функциональные свойства нейтрофилов: формирование внеклеточных сетей (нетоз, NETs) микроскопически с окраской по Романовскому-Гимзе при культивировании клеток в течение 30 и 150 минут; образование активных форм кислорода-АФК (цитохимический метод с нитросиним тетразолием), апоптотическую активность (люминесцентная микроскопия после окраски смесью акридинового оранжевого с этидиумом бромидом), а также поглотительную способность в реакции фагоцитоза. Тесты ставили в спонтанном и стимулированном вариантах, в качестве стимулятора использовали убитый нагреванием музейный штамм S. aureus АТСС 25923. Выявлено повышение параметров нетоза в 30-минутных (но не 150-минутных) культурах клеток как в спонтанном, так и в стимулированном вариантах (р < 0,001), и апоптоза (р = 0,02). Продукция нейтрофилами активных форм кислорода и их поглотительная активность значимо не изменялись. Параметры нетоза и апоптоза прямо коррелировали между собой (r s = 0,34; р = 0,03), а также зависели от уровня азотемии (коэффициент корреляции составил для показателей нетоза и уровня мочевины r s = 0,41; р = 0,01, для апоптоза и мочевиныr s = 0,34; р = 0,02). Обнаружена взаимосвязь между уровнем апоптоза и продукцией АФК нейтрофилами (r s =-0,51; р = 0,03). Проведенные исследования свидетельствуют, что у пациентов с ХБП в терминальной стадии повышена готовность к выполнению суицидальной программы-апоптозу и нетозу. Учитывая повышение параметров нетоза именно при краткосрочном культивировании лейкоцитов (30 минут), можно предполагать участие в первую очередь NADPH-независимых механизмов. Продемонстрированная нами прямая зависимость параметров нетоза и апоптоза от уровня азотемии позволяет рассматривать в качестве одной из первоочередных причин повышения активности суицидальной программы нейтрофилов накопление в организме пациентов продуктов эндогенной интоксикации, в частности окисленных протеинов.