Molecular techniques for the study of rhizobial ecology in the field

Aplicação de genes marcadores em estudos de ecologia microbiana com ênfase no sistema GUS

“…Muitas vezes, algumas metodologias como sorologia e testes de resistência a antibióticos, que são marcas fenotípicas, são descritas como marcadores moleculares para enfatizar que as novas metodologias, baseadas na biologia molecular, podem ser vistas como uma extensão dos procedimentos já existentes. Esses métodos mais tradicionais usados na identificação dos organismos utilizam moléculas endógenas como marcadores, tais como enzimas metabólicas características (WILSON, 1995).…”

“…Além disso, sofrem outras limitações, apresentando-se trabalhosas ou imprecisas (WILSON, 1995;WILSON et al, 1996;SESSITSCH et al, 1998).…”

“…As técnicas baseadas nos ácidos nucléicos são, em muitos casos, complementares às técnicas que empregam um gene marcador (WILSON, 1995). As desvantagens dessas téc-nicas, quando comparadas com a utilização dos "genes marcadores introduzidos", estão no fato de serem mais complexas tecnicamente, especialmente quando se pretende alcançar um maior nível de sensibilidade (SAYLER et al, 1992;STEFFAN & ATLAS, 1991).…”

“…Os genes marcadores codificam produtos que podem ser facilmente identificados ou medidos, especialmente enzimas que podem atuar em diferentes substratos, fornecendo produtos coloridos ou fluorescentes, facilmente detectáveis (JEFFERSON, 1989;WILSON, 1995). De uma maneira geral, a introdução de tais genes marcadores facilita o monitoramento de estirpes bacterianas específicas.…”

“…Eles podem ser usados para substituir um gene estrutural de interesse e, portanto, atuar como repórter da expressão do gene, através da criação de uma "fusão de gene". Em estudos da ecologia microbiana, os genes repórteres são utilizados para facilitar a detecção de estirpes de bactérias marcadas (WILSON, 1995).…”