Molecular Diagnosis of Leishmaniasis, Species Identification and Phylogenetic Analysis

Tsokana, Constantina N.; Athanasiou, Labrini V.; Valiakos, Vassiliki Spyrou George; Manolakou, Katerina; Billinis, Charalambos

doi:10.5772/57448

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“…MLEE is a useful technique for characterizing species, as it permits the analysis of genetic variability between and among species, as well as their taxonomies and phylogenies (40,41). However, this methodology does not permit the direct identification of clinical specimens, the culture is required and it has low sensibility for samples from patients with mucosal and chronic cutaneous leishmaniasis, which prevents obtaining large amounts of parasites.…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

“…However, this methodology does not permit the direct identification of clinical specimens, the culture is required and it has low sensibility for samples from patients with mucosal and chronic cutaneous leishmaniasis, which prevents obtaining large amounts of parasites. Besides, MLEE is technically demanding and requires prolonged times for obtaining results (10)(11)(12)41). An alternative to discriminate between Leishmania species is PCR-RFLP, a widely used test that is performed with different molecular targets to determine the ability to differentiate species (42).…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

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Molecular typing of Leishmania (Leishmania) amazonensis and species of the subgenus Viannia associated with cutaneous and mucosal leishmaniasis in Colombia: A concordance study

et al. 2018

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Introduction: Multilocus enzyme electrophoresis (MLEE) is the reference standard for the characterization of Leishmania species. The test is restricted to specialized laboratories due to its technical complexity, cost, and time required to obtain results. Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) is used to identify Leishmania species. Objective: To establish the concordance between the two tests as identifying methods for circulating species in Colombia. Materials and methods: A total of 96 isolates from patients with cutaneous or mucosal leishmaniasis were selected and identified by MLEE and PCR-RFLP with miniexon and hsp70 as the molecular targets, which were used sequentially. Restriction enzymes HaeIII and BccI were similarly applied. Cohen's kappa coefficient and the 95% confidence interval (CI) were calculated. Results: The kappa coefficient and the 95% CI between MLEE and PCR-RFLP displayed "very good" concordance with a coefficient of 0.98 (CI95%: 0.98 to 1.00). The identified species were Leishmania Viannia braziliensis, Leishmania Viannia panamensis, Leishmania Viannia guyanensis and Leishmania Leishmania amazonensis. A total of 80 of the 96 isolates were sequenced and the results obtained by PCR-RFLP were confirmed. Conclusion: Due to the concordance obtained between tests results with the amplification of the genes miniexon and hsp70, PCR-RFLP is proposed as an alternative for identifying circulating Leishmania species in Colombia.

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Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

Molecular typing of Leishmania (Leishmania) amazonensis and species of the subgenus Viannia associated with cutaneous and mucosal leishmaniasis in Colombia: A concordance study

et al. 2018

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“…54 Seu uso é limitado devido ao alto custo, necessidade de grande quantidade de proteína e cultura, menor poder de distinção e exigência de laboratórios equipados. 55,56…”

Section: Eletroforese Enzimáticaunclassified

Panorama das novas tecnologias no diagnóstico da Leishmaniose Visceral em vigência de coinfecção com o vírus HIV: uma revisão integrativa da literatura

Tacaci¹,

Ferro²,

Silva³

et al. 2023

Braz. J. Develop.

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Contextualização: As doenças tropicais negligenciadas (DTNs) ocorrem em condições de clima tropical e subtropical e estão intimamente ligadas à pobreza, prosperando em áreas onde o acesso ao saneamento básico, água potável e cuidados de saúde é limitado. A leishmaniose encontra-se na atual lista das 20 DTNs definidas pela OMS. Falhas recorrentes no diagnóstico da LVH, muitas vezes associadas às abordagens convencionais são determinantes para os desfechos de morbimortalidade. Justificativa: Ressalta-se a importância da avaliação científica e criteriosa a respeito das novas metodologias diagnósticas de precisão, para que sejam tomadas medidas terapêuticas eficazes visando mitigar os efeitos da evolução da leishmaniose visceral humana (LVH), sobretudo nos pacientes coinfectados pelo vírus HIV (LVH-HIV). Objetivo: Discutir as recentes tecnologias de precisão diagnóstica em LVH, na situação de coinfecção o HIV. Metodologia: A revisão integrativa foi conduzida conforme parâmetros metodológicos previamente estabelecidos, obedecendo etapas rigorosas de confecção. Estas fases são essenciais na identificação do tema de pesquisa, formulação dos critérios de inclusão, extração de dados oriundos dos estudos inclusos, análise metodológica destes, além da interpretação de resultados e síntese descritiva. Resultados: Após a busca e seleção de estudos nas bases de dados eletrônicas: Pubmed/Medline e Embase, avaliamos 201 estudos, delimitando 13 destes como pertinentes exclusivamente aos critérios de inclusão. O conjunto avaliado indica avanço promissor em áreas como: Proteômica, imunoproteômica, processos moleculares avançados, nanodiagnóstico e citometria de fluxo. Conclusão: O diagnóstico preciso e oportuno da condição LVH-HIV desempenha papel crucial na identificação de pacientes, inclusive assintomáticos e subclínicos. As novas metodologias diagnósticas de precisão surgem como opções revolucionárias e merecem investigações científicas futuras para se recomendar a melhor conduta baseada em evidências, fornecendo ao paciente melhores desfechos em morbimortalidade.

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“…Un buen desempeño diagnóstico de los métodos convencionales (frotis/cultivo) depende en gran me dida de cargas parasitarias relativamente altas y a la ausencia de contaminación bacteriana en las le siones [15]. Esta última puede inducir no sólo resul tados falsos positivos, sino también falsos negativos [16], aun cuando las características clínicas/epi demiológicas sugieran que el paciente presente una LC. De hecho, las lesiones de LC con cargas para sitarias bajas representan uno de los escenarios clínicos en dónde los métodos parasitológicos con frecuencia fallan en diagnosticar la infección.…”

Section: Introductionunclassified

Comparación de pruebas moleculares para el diagnóstico de Leishmania spp. en lesiones cutáneas con baja carga parasitaria

Reina,

Pineda,

Calzada

et al. 2023

Rev Med Panama

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Introducción: La leishmaniasis cutánea (LC) es un problema grave de salud pública en Panamá. El diagnóstico de esta parasitosis ha sido siempre desafiante, no sólo debido a su similitud con otras infecciones dérmicas, sino también a características particulares de las lesiones, como cargas parasitarias bajas. Materiales y Métodos: En este estudio, se evaluaron mediante cuatro métodos moleculares, 235 muestras de ADN procedentes de lesiones con frotis negativos por LC obtenidas durante el período 2015-2019. Resultados: Los resultados señalan que las sensibilidades encontradas fueron de 75.6% (IC 0.6234-0.8709) para la PCR kDNA-Género específico, de 66.7% (IC 0.5359-0.776) para la PCR Hsp70-Género específico y de 77.6% (IC 0.645-0.8949) para la qPCR 18S ribosomal. Todas las pruebas obtuvieron un valor predictivo positivo de 100%, mientras que el valor predictivo negativo más alto fue con la qPCR (80.58%) y el más bajo con el PCR Hsp70-Género específico (73.2%). En cuanto a la precisión de diagnóstico se obtuvo un rango mayor del 82% en todas las pruebas evaluadas. Conclusión: Este estudio confirma la buena sensibilidad de la PCR kDNA-Viannia para el análisis de lesiones de LC con baja carga parasitaria. Esta metodología es relativamente fácil de estandarizar, por lo que se recomienda su uso en laboratorios clínicos regionales de Panamá. Aun cuando la qPCR 18S ribosomal presentó una sensibilidad relativamente menor, el uso de esta metodología debe ser también considerada por su facilidad de uso, menor tiempo de ejecución y capacidad de cuantificación.

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Molecular Diagnosis of Leishmaniasis, Species Identification and Phylogenetic Analysis

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Molecular typing of Leishmania (Leishmania) amazonensis and species of the subgenus Viannia associated with cutaneous and mucosal leishmaniasis in Colombia: A concordance study

Molecular typing of Leishmania (Leishmania) amazonensis and species of the subgenus Viannia associated with cutaneous and mucosal leishmaniasis in Colombia: A concordance study

Panorama das novas tecnologias no diagnóstico da Leishmaniose Visceral em vigência de coinfecção com o vírus HIV: uma revisão integrativa da literatura

Comparación de pruebas moleculares para el diagnóstico de Leishmania spp. en lesiones cutáneas con baja carga parasitaria

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