RESUMO -Objetivou-se avaliar o efeito de quatro níveis de uréia na ração: 0; 0,65; 1,3 e 1,95% na matéria seca (MS), sobre a estimativa da produção de proteína microbiana por meio dos derivados de purinas na urina, em duas metodologias de coleta em novilhos de quatro grupos genéticos: Holandês, ½ sangue Holandês-Guzerá, ½ sangue Holandês-Gir e Zebu. Os animais foram alimentados com 50% de feno de capim tifton-85 e 50% de concentrado e distribuídos em quatro quadrados latinos (grupos genéticos) 4 × 4, sendo quatro animais, quatro períodos experimentais e quatro tratamentos (rações). As dietas continham aproximadamente 12% PB. As amostras de urina, em cada período experimental, foram obtidas a partir de coletas em 24 horas e por meio da coleta spot de urina, quando os animais urinaram espontaneamente. Na urina foram realizadas as análises dos derivados de purinas, alantoína e ácido úrico. Foram feitas comparações entre a produção microbiana usando as bases purinas no abomaso com os derivados de purinas na urina; entre as determinações da produção microbiana pelos derivados de purinas com duas equações distintas ou com as bases purinas no abomaso; e entre a estimativa da produção urinária, dos derivados de purinas e da produção microbiana através da coleta spot de urina com a coleta total de urina em 24 horas. A produção e as eficiências microbianas mostraram-se superiores para os animais holandeses, intermediárias para os mestiços e inferiores para os zebuínos. A estimativa da produção de compostos nitrogenados microbianos pode ser feita a partir da excreção dos derivados de purinas na urina. A coleta spot de urina consiste em metodologia rápida e eficaz na estimativa da excreção urinária dos derivados de purinas e da produção de compostos nitrogenados microbianos.Palavras-chave: nitrogênio microbiano, novilhos, purinas na urina, uréia Urea levels in diet for steers of four genetic groups: microbial protein production by the urinary purine derivatives, using two collection methodologies ABSTRACT -The effect of four dietary urea levels: 0, 0.65, 1.3 and 1.95% in dry matter (DM), on the microbial protein production by means of the urinary purine derivatives was evaluated by using two collection methodologies in steers of four genetic groups: Holstein in, ½ Holstein-Guzera, ½ Holstein-Gir and Zebu. Animals were fed diets with 50:50 tifton-85 bermudagrass hay to concentrate ratio and assigned to four 4 × 4 latin squares (genetic groups): four animals, four experimental periods and four treatments (diets) and were. Diets approximately contained 12% CP. The urine samples, from each experimental period, were obtained from 24-h collection and spot urine collection, when the animals spontaneously urinated. Analyses of purine derivatives, allantoin and uric acid were performed in the urine. A comparison among the microbial production using the purine bases in the abomasum and urinary purine derivatives; determination of microbial production by purine derivatives using two different equations or purine bases method in the ab...