Microdissecção e captura a laser na investigação do gene TP53 em tecidos incluídos em parafina

Ihlaseh, Shadia Muhammad; Oliveira, Maria Luiza Cotrim Sartor de; Silva, Glenda Nicioli da; Franchi, Carla Adriene da Silva; Camargo, João Lauro Viana de

doi:10.1590/s1676-24442007000100012

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“…The initial PCR products were diluted and re-amplified in six In general, desoxyribonucleic acid (DNA) recovered from formalin-fixed paraffin-embedded tissues is highly degraded (10) and may be unsuitable for most molecular techniques such as polymerase chain reaction (PCR). Although some studies have shown that PCR can be successfully performed with DNA recovered from formalin-fixed paraffin-embedded-tissues (2,3,5,9) , results have still been limited in some laboratories.…”

Section: Resumo Abstractmentioning

confidence: 99%

Optimization of methods to assess mitochondrial DNA in archival paraffin-embedded tissues from mammary canine tumors

Bertagnolli¹,

Máximo²,

Asch³

et al. 2008

J. Bras. Patol. Med. Lab.

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A presente comunicação descreve as modificações usadas para extrair e amplificar o DNA mitocondrial obtido de amostras de tumores mamários caninos fixados em formol tamponado a 10% e incluídos em parafina. Os componentes epiteliais e mesenquimais (condromixóide e condróide), bem como a mama normal adjacente, foram microdissectados manualmente de 19 tumores mamários (10 tumores mistos benignos e nove carcinomas em tumores mistos). O DNA foi extraído utilizando-se o Invisorb ® Spin Tissue Mini Kit com modificações do protocolo proposto pelo fabricante. Um fragmento de 273-pb foi amplificado por reação em cadeia da polimerase (PCR) e seqüenciado em seqüenciador automático. O fragmento foi analisado em 100% das amostras, entretanto modificações como lise adicional, redução do volume das soluções de extração e PCR, aumento da temperatura de anelamento e do número de ciclos de amplificação foram necessárias. Em seis amostras os produtos iniciais de PCR foram diluídos e reamplificados para obtenção de sucesso. resumo abstractIn this study we describe the alterations used to extract and amplify mitochondrial desoxyribonucleic acid (DNA) from formalin-fixed paraffin-embedded samples of canine mammary tumors. The epithelial and mesenchymal components (chondromyxoid and chondroid) of each tumor, as well as the normal mammary gland tissues, were manually microdissected from 19 mixed canine mammary tumors (10 benign mixed tumors and nine carcinomas arising in mixed tumors). DNA was extracted by Invisorb ® Spin Tissue Mini Kit, with protocol changes proposed by the manufacturer. A 273-bp fragment was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and submitted to automatic sequence analysis. The fragment was successfully analyzed in 100% of the samples. However, an additional lysis step, the reduction of volume in buffer solutions and PCR, a higher annealing temperature and an increase in the number of PCR cycles were required. The initial PCR products were diluted and re-amplified in six unitermos key words Neoplasia Cão Mesenquimal Neoplasia Dog Mesenchymal Primeira submissão em 06/05/08 Última submissão em 10/10/08 Aceito para publicação em 09/11/08 Publicado em 20/08/08 J Bras Patol Med Lab • v. 44 • n. 4 • p. 305-308 • agosto 2008

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confidence: 99%

Optimization of methods to assess mitochondrial DNA in archival paraffin-embedded tissues from mammary canine tumors

Bertagnolli¹,

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et al. 2008

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Microdissecção e captura a laser na investigação do gene TP53 em tecidos incluídos em parafina

Abstract: Microdissecção e captura a laser na investigação do gene TP53 em tecidos incluídos em parafi na Laser-capture microdissection for TP53 gene analysis in paraffi n-embedded tissues

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Optimization of methods to assess mitochondrial DNA in archival paraffin-embedded tissues from mammary canine tumors

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