Micro-CT in ophthalmology: ex vivo preparation and contrasting methods for detailed 3D-visualization of eye anatomy with special emphasis on critical point drying

Abstract

Background: Micro-computed tomography (micro-CT) provides detailed 3-dimensional (3D) visualization of anatomical structures and encourages morphological reinvestigation of organs with delicate features. The low radiodensity of soft tissues necessitates preceding sample preparation to conduct X-ray imaging with decent contrast between different tissues. In this study, we demonstrate the preparation with three radiopaque agents in combination with elimination of liquids by critical point drying (CPD) introduced for ocular samples.Methods: Enucleated porcine eyes were prepared with ethanolic iodine (EI), aqueous iodine-potassium iodide, or ethanolic phosphotungstic acid (EPTA). Micro-CT scans of the samples were conducted in a moist environment with an isotropic resolution of 9.2-12.5 µm voxel size. Subsequently, samples were chemically dehydrated and critical point (CP) dried to conduct a second scan in a dry environment with a resolution up to 4.7-5.4 µm in voxel size. The visualization effects were qualitatively and semi-quantitatively evaluated with regard to the generated contrast between different ocular tissues.Results: All three contrast agents accumulated well in most of the investigated ocular tissues and lead to an increased X-ray attenuation which allowed for differentiated visualization of ocular structures. Problematic agent penetration into the lens was obvious for iodine-potassium iodide and EPTA. Artificial damages of the lens and thickness reduction for the cornea and sclera due to CPD were noticed. The effects of the different contrasting treatments are described and compared with regard to the effects of CPD. Exclusively CP dried samples that were not treated with contrast agents could also be visualized excellently with a good distinction of different ocular structures from each other.Conclusions: All ocular structures can be visualized by micro-CT. To contrast moist samples, the best results were achieved with iodine potassium iodide (IPI). CPD improved the scan quality in all cases. Even without pretreatment with contrasting agents, the CP dried samples showed a contrast similar to the IPI treated samples.

Ex-vivo-Mikro-CT in der Augenheilkunde: Probenbehandlung und -kontrastierung für die 3D-Darstellung

“…Kontrastiermethoden die Darstellung spezifischer Gewebe in der Probe verbessern, allen voran die Kontrasteigenschaften von ansonsten eher schwach röntgendichten Weichteilgeweben 19 , 20 , 21 . Dies ist gerade für die Analyse der vorderen Augenkammer mit ihren verschiedenen Gewebekompartimenten von Bedeutung 6 . Für die Differenzierung der Zielgewebe gegenüber dem jeweiligen Umgebungsmedium (z.…”

“…Das zugrunde liegende Prinzip ist hierbei die differenzielle Anlagerung bestimmter röntgendichter Elemente an die jeweiligen Gewebekomponenten. Die gängigsten Kontrastmittel in der Mikro-CT, auch für die Anwendung in der Ophthalmologie, basieren auf Jod: wässriges Jod-Kaliumjodid (bekannt als Lugolʼsche Lösung) oder in Ethanol gelöstes Jod 4 , 5 , 6 . Beides ist vergleichsweise einfach in der Zusammensetzung und Anwendung, bei der Verwendung gesundheitlich weitgehend unbedenklich und einfach zu lagern.…”

“…Die Anzahl der ophthalmologischen Arbeiten, in denen okulare Strukturen mittels Mikro-CT untersucht wurden, ist bis dato überschaubar 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 . Dennoch haben diese Studien bereits anschaulich das Potenzial der Mikro-CT gezeigt, wonach selbst feinste okulare Strukturen in ihrer 3-Dimensionalität darzustellen und zu analysieren sind.…”

“…Die Autoren des vorliegenden Artikels haben einen ähnlichen quantitativen Vergleich verschiedener Kontrastmittel anhand von formalinfixierten enukleierten Schweineaugen vorgenommen und den Einsatz der Kritisch-Punkt-Trocknung (KPT; siehe nachfolgendes Kapitel) für die Anwendung im Mikro-CT getestet 6 .…”

“…Die röntgenbasierte Mikrocomputertomografie (Mikro-CT) ist demgegenüber ein weitgehend zerstörungsfreies Bildgebungsverfahren, das die räumliche Visualisierung und Analyse interner Strukturen ex vivo im Auge mit hoher Auflösung ermöglicht 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 . Mikrocomputertomografen (Mikro-CTs) sind keine bloßen Miniaturisierungen der klinischen CTs.…”