Método rápido para extração de DNA de Puccinia kuehnii

Abstract

RESUMOPalavras-chave adicionais: Ferrugem alaranjada, PCR, Saccharum spp., esporos, preservação.Foi desenvolvido um método eficiente, rápido e de baixo custo para extração de DNA de Puccinia kuehnii, patógeno causador da ferrugem alaranjada em cana-de-açúcar, importante doença de recente emergência no ocidente. O protocolo de extração foi testado em esporos Alessio, V.M.; Hoffmann, H.P.; Carneiro, M.S. Método rápido para extração de DNA de Puccinia kuehnii. Summa Phytopathologica, v.39, n.3, p.198-200, 2013. recém-coletados e em esporos armazenados a -80°C por 7 meses. Com uma quantidade inicial de 15 mg de esporos foi obtido concentrações médias de DNA variando de 880,8 mg/mL a 1115,9 mg/mL. A amplificação do DNA extraído foi positiva para as amostras avaliadas.As duas ferrugens de maior importância econômica que afetam a cana-de-açúcar (Saccharum spp.) são a ferrugem marrom e a ferrugem alaranjada causadas pelos fungos Puccinia melanocephala Syd. & P.Syd. e P. kuehnii (W. Krüger) E. J. Butler, respectivamente (2).A ferrugem alaranjada é caracterizada por causar manchas cloróticas nas folhas mais jovens que progridem rapidamente para lesões que se rompem, formando uredínios comumente chamados de pústulas as quais são observadas geralmente na face abaxial das folhas. As pústulas podem ocorrer distribuídas por toda a superfície da folha, porém, agrupadas e próximas ao ponto de inserção no colmo. Em variedades altamente suscetíveis, as lesões coalescem causando necrose das folhas. A doença difere da ferrugem marrom por apresentar pústulas ligeiramente arredondadas de coloração laranja distribuídas pelas folhas de maneira desigual (5).A ferrugem alaranjada não apresentava grande importância econômica até o ano de 2000 quando perdas na Austrália, em razão da infecção da variedade Q124 que ocupava grande parte dos canaviais do país, chegaram a 40% em toneladas de cana por hectare o que representou perdas de 150 a 210 milhões de dólares para o setor (5, 6).A primeira ocorrência reportada no Brasil foi à região de Araraquara em dezembro de 2009 em um campo de multiplicação de clones pré-comerciais (cv. Centauro). Também já foi reportada a suscetibilidade das variedades comerciais SP89-1115, RB72454 e SP84-2025 (1). Diante desse novo panorama, a ferrugem alaranjada ganhou destaque, porém, as condições de conservação, recuperação e germinação ainda não estão bem estabelecidas (1). Nesse sentido, torna-se importante o desenvolvimento de metodologias que viabilizem estudos futuros desse fitopatógeno. O isolamento do DNA é pré-requisito fundamental para diversas técnicas de biologia molecular e até o momento, as metodologias apresentadas para o isolamento e purificação de DNA genômico de P. kuehnii foram baseadas em kits comerciais (2,3,4).O objetivo deste trabalho foi desenvolver um método de extração de DNA de esporos de P. kuehnii em amostras recém coletadas e amostras preservadas por congelamento, avaliando-se a eficiência do método através da PCR (Polymerase Chain Reaction) utilizando primers específicos para ident...