SUMMARYThe infectious pancreatic necrosis virus, IPNV, is the etiological agent of a highly contagious disease that affects young salmon. The virus is mostly horizontally transmitted; therefore virus quantitation in water is mandatory for a proper sanitary management in the salmon industry as well as in the environment close to the hatcheries. To evaluate the water as a risk factor for IPNV infection in cultured or wild animals, it is necessary to titrate the virus with a suitable sensitivity. Therefore, a methodology that allows IPNV concentration to be determined in water using two kinds of ultrafiltration was developed. One, based on the tangential flow of the sample along the surface of a membrane, the other based on the retention of the viral particles at the surface of membranes with controlled pore diameter. Reagents and conditions were selected to reduce virus inactivation and/or virus binding to the filters. Finally, a protocol was developed that allows the concentration of IPNV in three orders of magnitude and with a total recovery of infectivity to be determined. This method can be performed in less than one day including virus titration using the fluorescent foci method
INTRODUCCIONEl virus de la necrosis pancreática infecciosa (virus IPN) es considerado como el virus de especies salmonídeas más prevalente en el mundo. Es el agente responsable de la necrosis pancreática infecciosa (IPN), enfermedad que es una de las principales patologías a las que se ha visto enfrentada la salmonicultura nacional y mundial en los últimos 10 años. Según datos recientes, los brotes del virus IPN en el país afectaron al 48% del total de las pisciculturas, al 61% de los centros de esmoltificación y al 49% de los centros de engorda en 1999 (FIP 2003) provocando enormes pérdidas al sector.El virus IPN causa una infección sistémica aguda en alevines de 1 a 6 meses de edad, pudiendo provocar, incluso, mortalidades acumulativas del orden del 100% de la población afectada. Los peces sobrevivientes permanecen en estado portador de por vida, diseminando el virus por largo tiempo, manteniendo así el virus en el agua (Wolf 1988). Sólo la detección del virus activo causante de la necrosis pancreática infecciosa puede indicar el verdadero nivel de riesgo para una piscicultura. Las técnicas empleadas con este propósito suelen ser lentas en su aplicación, sin embargo, recientemente se desarrolló una téc-nica que permite titular al virus IPN en menos de 20 h. La metodología se basa en la visualización mediante microscopia de epifluorescencia (MEF) de la amplificación del virus en células CHSE-214. Las células infectadas (fluorescencia positiva) son cuantificadas como Focos Fluorescentes (FF) de forma equivalente a la técnica de unidades formadoras de placas (Espinoza y Kuznar 2002).Para desarrollar la enfermedad un animal debe estar expuesto a una concentración mínima de virus; en principio, para el virus IPN, ésta debiera ser sobre 1x10 2 UFP/l