Method for rapid transformation of enterobacteria and some factors influencing its efficiency

Abstract

Вступ. Трансформація ентеробактерій плазмідною ДНК є звичайною процедурою у молекулярному клонуванні. Проте відносно низька трансформованість природних штамів Klebsiella [1, 2] та інших енте-робактерій є причиною того, що у ці організми, як правило, уводять готові генноінженерні конструкції. За такої організації експериментів фактор часу відіграє велику роль і, як наслідок, проблема розробки швидких, але достатньо ефективних методів введення плазмідної ДНК у ентеробактерії є актуальною. Стандартні процедури, які використо-вують для виготовлення компетентних клітин Klebsiella та інших ен-теробактерій (звичайно для цієї мети користуються методом, розроб-леним Cohen [3], та його модифікаціями), займають багато часу. При цьому засоби тривалого збереження компетентних клітин бактерій, відмінних від Escherichia coli, розроблені погано. Більш того, звичай-но нема необхідності (або можливості) зберігати препарати компе-тентних клітин усіх штамів, з якими працюють у лабораторії. Нещо-давно Merrick et al.[4] опублікували модифікований метод заморо-жування-відтавання для трансформації Е. coli і Klebsiella.Незва-жаючи на досить високу ефективність цього метода (до 7-Ю 4 транс-формантів на 1 мкг ДНК для К. aerogenes), він обіймає досить трива-лі етапи «розгонки» нічної культури (2 год) та інкубації клітин після відтавання (2-4 год.). Ми пропонуємо дві модифікації цього методу: стандартну та спрощену. Остання виключає використання обох цих стадій і дозволяє на протязі 5 хв зробити трансформацію Е. coli та K-oxytoca з ефективністю біля 1-Ю 4 трансформантів на 1 мкг ДНК-Матеріали і методи У роботі використовували штами Е. coli JM109