Membrane Insertion and Biogenesis of the Turnip Crinkle Virus p9 Movement Protein

Abstract

Plant viral infection and spread depends on the successful introduction of a virus into a cell of a compatible host, followed by replication and cell-to-cell transport. The movement proteins (MPs) p8 and p9 of Turnip crinkle virus are required for cell-to-cell movement of the virus. We have examined the membrane association of p9 and found that it is an integral membrane protein with a defined topology in the endoplasmic reticulum (ER) membrane. Furthermore, we have used a site-specific photo-cross-linking strategy to study the membrane integration of the protein at the initial stages of its biosynthetic process. This process is cotranslational and proceeds through the signal recognition particle and the translocon complex.

Charge Pair Interactions in Transmembrane Helices and Turn Propensity of the Connecting Sequence Promote Helical Hairpin Insertion

“…44,47 Full-length 2B DNA was amplified from 2B/P2 plasmid using a reverse primer with an optimized Ct glycosylation tag 25 and a stop codon at the end of the 2B sequence (2B-derived expressions). Truncated 2B DNA was amplified by PCR from 2B/P2 plasmid using reverse primers with an optimized Ct glycosylation tag and a stop codon at the end annealing at specific position to obtain the desired polypeptide length (76 residues).…”

Análisis Funcional De Proteínas Codificadas Por El Virus De La Rotura Del Color De La Flor Del Pelargonium

“…En lo que respecta a la proteína p9 (DGBp2) de este virus, experimentos in vitro mostraron su capacidad de unirse a membranas microsomales derivadas del RE [Vilar et al, 2002]. Estos resultados eran consistentes con la presencia de dos regiones hidrofóbicas en la proteína que podían comportarse como dominios TM [Vilar et al, 2002;Saurí et al, 2005;Martínez-Gil et al, 2010]. Resultados similares se han obtenido más recientemente con las proteínas de movimiento del MNSV.…”

“…Además, los datos de topología de inserción obtenidos in vitro para algunas de las DGBp2 del género (p9-TCV y p7B-MNSV) no siempre son consistentes con la existencia de interacciones DGBp1:DGBp2 en la cara citosólica del RE. En este sentido, y para intentar armonizar ambas cuestiones, se han planteado algunas hipótesis que sugieren que ciertas DGBp2 podrían insertarse en las membranas del RE de forma dinámica o a través de distintas topologías [Martínez-Gil, 2009;Martínez-Gil et al, 2010] (Fig. 18).…”

“…A través de este último, p9 interacciona con su contraparte soluble, DGBp1 (p7), encargada de unir el vRNA [adaptado de Vilar et al, 2002]. (B) y (C) Para las DGBp2 del virus de las manchas necróticas del melón (MNSV) (p7B) [Martínez-Gil et al, 2007] y del virus del arrugamiento del nabo (TCV) (p9) [Martínez-Gil et al, 2010] se han determinado topologías de inserción en las cuales el extremo C-t queda orientado hacia la cara luminal del RE, donde podría establecer interacciones con factores del huésped (? ),cuando se llevan a cabo funciones como el aumento del SEL o la interacción con el citoesqueleto.…”

“…This trait probably causes the protein to become membrane embedded as described for the homologous CarMV and MNSV proteins and lately for that of Turnip crinkle virus (TCV) [Martínez-Gil et al, 2010;Navarro et al, 2006;Vilar et al, 2002]. However, several structural peculiarities distinguish PFBV p12 from similar proteins.…”