Lectin–carbohydrate affinity measured using a quartz crystal microbalance

Lebed, K.; Kulik, Andrzej; Forró, Lászlø; Lekka, Małgorzata

doi:10.1016/j.jcis.2006.01.053

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“…Uma maneira de analisar as interações lectina-carboidrato é por meio da determinação da afinidade entre a lectina e o carboidrato, o que vem sendo realizado por meio do modelo das isotermas de adsorção de Langmuir (LEBED, 2006;ZHANG, 2006;PEDROSO, 2008).…”

Section: Determinação Da Constante De Afinidade Aparente Das Interaçõunclassified

“…Onde ∆f é a variação de freqüência no equilíbrio, C é a concentração do ligante em solução, ∆f máx é a variação de freqüência quando a concentração do ligante é infinita (concentração de saturação dos sítios), e K' é a constante de afinidade aparente da interação entre a lectina e seu ligante (LEBED, 2006;ZHANG, 2006). Somente em concentrações muito baixas é que a quantidade de substância adsorvida é proporcional a concentração da mesma na solução (PEDROSO, 2006).…”

Section: Determinação Da Constante De Afinidade Aparente Das Interaçõunclassified

“…Além disso, quando os valores de ∆f t resultantes da ligação não forem muito grandes, é razoável assumir que ∆m é proporcional a ∆f t . Portanto, tal relação pode ser expressa pela Equação 27 (MAO, 2002;LEBED, 2006).…”

Section: Determinação Da Constante De Associação Cinética Para As Intunclassified

“…Esta curva é a base para a determinação da constante de associação cinética da interação, pois o tempo de relaxação está relacionado com a concentração inicial do ligante pela Equação 28 (MAO, 2002;LEBED, 2006).…”

Section: Determinação Da Constante De Associação Cinética Para As Intunclassified

“…A constante de associação cinética da interação lectina-glicoproteína é dada pela Equação 29 (MAO, 2002;LEBED, 2006). Embora as interações inespecíficas entre a glicoproteína HRP e a monocamada possam prejudicar a comparação entre as duas constantes calculadas para as interações ArtinM-HRP, ainda assim é possível se observar a equivalência entre a lectina nativa e recombinante.…”

Section: Determinação Da Constante De Associação Cinética Para As Intunclassified

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Estudo da equivalência entre a lectina artin M obtida a partir da semente da jaca e a sua forma recombinante na afinidade por glicanas

Pesquero¹

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Araraquara 2010 À minha mãe Elisabete, ao meu irmãoLucas e aos meus avós, Basilina e Antônio, por todo o apoio em todos os momentos de aflição, pelo imenso amor, carinho, preocupação e, principalmente pela paciência. AGRADECIMENTOSAo Prof. Dr. Paulo Roberto Bueno pela orientação, pela amizade, pelo apoio, e principalmente pela formação profissional passada a mim durante a execução deste trabalho.Ao Prof. Dr. Ronaldo Censi Faria pela amizade e paciência, e por todas as discussões, as quais foram fundamentais para a finalização e concretização deste trabalho. À Profª. Drª. Maria Cristina Roque-Barreira pela amizade e preocupação durante a minha estada em seu laboratório, pelas discussões e, principalmente pelo apoio em todos os momentos durante a realização deste trabalho. À Sandra Maria de Oliveira Thomaz pela amizade, por toda a ajuda, mas principalmente pelo acolhimento durante a minha estada em Ribeirão Preto. À D. Maria do Carmo Luiz pela amizade, paciência e pelo auxílio fornecido em todos os momentos em que foram solicitados.À administradora do LIEC, Rose pela amizade e, principalmente por todo o apoio e conhecimentos técnico e burocrático a mim concedido.À amiga Mariele Mucio Pedroso pela amizade e carinho, pela força em todos os momentos difíceis e, principalmente, pelas discussões e pela imensurável ajuda durante toda a execução deste trabalho, e sem a qual, ele não se concretizaria.Ao amigo Ailton Massaiti Watanabe pela amizade, pela força e paciência e, principalmente, pelas discussões e pela ajuda em todos os momentos em que dela necessitei.Ao amigo Josiel José da Silva pela amizade, pela ajuda na finalização deste trabalho e também por ensinar muito mais do que consegui ensiná-lo. À Fernanda Carvalho pela amizade e pelo total apoio e dedicação durante o tempo em que trabalhamos juntas.Aos demais amigos Elaine Muniz, Carol Rabal, Marcos Foguel, Márcio Goes, Elsa, Grazielle Setti, Adriano, Carla e Márcio Santos, pela amizade, apoio e carinho, e também por todos os momentos felizes de comemoração e por àqueles não tão felizes, mas que também ajudaram a me tornar uma pessoa melhor.À todos os alunos da Prof. Maria Cristina Roque-Barreira pela amizade, acolhimento e auxílio durante a minha estada em seu laboratório.À todos a minha imensa e eterna gratidão! RESUMONo presente trabalho foi avaliada a equivalência entre as formas nativa e recombinante da lectina Artin M utilizando como ligante a peroxidase de raiz forte (HRP) por meio da técnica de microbalança a cristal de quartzo. Para tal foi preparado um biossensor por meio da imobilização da lectina, tanto nativa como recombinante, na superfície do cristal de quartzo piezelétrico. A imobilização das lectinas foi realizada por meio da construção de uma monocamada auto organizada utilizando dois alcanotióis, ácido 11-mercaptoundecanóico e o 2-mercaptoetanol. Para o acoplamento das proteínas foram utilizados N-etil-N-(dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC) e N-hidoxisuccinimida (NHS) que formam com os grupamentos carboxílicos um intermediário reativo. Após a...

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Estudo da equivalência entre a lectina artin M obtida a partir da semente da jaca e a sua forma recombinante na afinidade por glicanas

Pesquero¹

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ArtinM Binding Effinities and Kinetic Interaction with Leukemia Cells: A Quartz Crystal Microbalance Bioelectroanalysis on the Cytotoxic Effect

et al. 2017

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ArtinM, a D‐mannose‐binding lectin from Artocarpus heterophyllus (jackfruit), interacts with N‐glycosylated receptors on the surface of several cells of hematopoietic origin, triggering cell migration, degranulation, and cytokine release. Because malignant transformation is often associated with altered expression of cell surface glycans, we evaluated the interaction of ArtinM with human myelocytic leukemia cells by Quartz Cristal Microbalance (QCM) and cross compared this investigation with cellular responses (cytotoxicity) to lectin binding by the colorimetric assay MTT, which is a standard method in biology. QCM analysis was able to provide additional information (not possible to be obtained by MTT) that impact on the knowledge of medical biology related to leukemic cells. For instance, it was shown that association rate constant of ArtinM and cellular membranes (obtained from QCM) of leukemia cell varies across the myeloid leukemia cell lines, decreasing as cytotoxic effect increases. Meanwhile no differences were observed for dissociation rate constants so that the equilibrium binding affinity constant was observed to be a direct function of the association rate event. It was supposed that ArtinM cytotoxicity is affected by the association time with glycans on the cellular membranes of leukemia cells in a way that the higher it is the association time (the lower was the association rate constant) the higher is the ArtinM cytotoxicity over the leukemia cell lines.

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A survey of the 2006–2009 quartz crystal microbalance biosensor literature

Becker

Cooper

2011

J of Molecular Recognition

161

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Since the publication of the original review of piezoelectric acoustic sensors in this series there has been a consistent, gradual expansion in the number of published papers using 'quartz crystal microbalances' (QCM). Between 2001 and 2009, the number of QCM publications per annum has increased from 49 to 273, with a two-fold increase in papers per annum between 2004 and 2008. Within the field, comparing the time covered by the current to the previous review, there are trends towards increasing use of QCM in the study of protein adsorption to surfaces (93% increase), homeostasis (67% increase), protein-protein interactions (40% increase) and carbohydrates (43% increase). New commercial systems have been released that are driving the uptake of the technology for characterization of binding specificities, affinities, kinetics and conformational changes associated with a molecular recognition event. This paper highlights theoretical and practical aspects of the principles that underpin acoustic analysis, then reviews exemplary papers in key application areas involving small molecular weight ligands, carbohydrates, proteins, nucleic acids, viruses, bacteria, cells and membrane interfaces.

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Lectin–carbohydrate affinity measured using a quartz crystal microbalance

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Estudo da equivalência entre a lectina artin M obtida a partir da semente da jaca e a sua forma recombinante na afinidade por glicanas

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