Konventionelle und molekularpathologische Untersuchungen während und nach klinischer Herztransplantation

Abstract

Zusammenfassung Die wesentlichen Fragen nach Herztransplantation(HTx) beinhalten Transplantatversagen, akute Abstol3ung, Infektionen und die chronische Rejektion. Im Rahmen der HTx wurden rechtsventrikul~ire Myokardbiopsien zu folgenden Zeitpunkten entnommen: a) vor Kardioplegie, b) sofort nach Kardioplegie mit Custodiol ® und Explantation, c) vor Implantation, d) nach 30 und/oder 60 rain Reperfusion, e) im ersten postoperativen Monat w6chentlich und danach in gr613eren Intervallen. Nach Formalinfixierung der Proben und Schnelleinbettung in Paraffin erfolgten histopathologische Begutachtung und immunhistochemische Analysen. Nach Fixierung mit gepuffertem Glutar-und Paraformaldehyd wurde der ultrastrukturelle Erhaltungsgrad des Myokards beurteilt. Schockgefrorene Proben wurden fiir immunhistochemische und molekularpathologische Untersuchungen herangezogen. Mittels konventioneller Licht-und Elektronenmikroskopie wurden Ver/inderungen der Zusammensetzung des Myokards (interstitielle Infiltrate, Fibrose), der Kardiomyozyten (Zellgdem, Hypertrophie) und Endothelien (Organellenschfiden, Zellgdem) qualitativ und morphometrisch charakterisiert. Molekulare Ver/inderungen im Rahmen entztindlicher Prozesse (akuter myozyt/irer und/oder vaskul~irer Rejektionen, Infektionen) oder komplexer Vorgfinge wie der chronischen Rejektion wurden mittels Immunhistochemie auf Protein-Ebene und Polymerase-Kettenreaktion (PCR) oder In situ-Hybridisierung auf DNA-oder mRNA-Ebene analysiert.Qualitativ und morphometrisch waren lichtmikroskopisch nach vier Stunden Ischfimie keine Unterschiede zwischen den nach Ex-und Implantation entnommenen Proben auszumachen. Elektronenmikroskopisch zeigten die Kapillarendothelien eine wesentlich hghere Empfindlichkeit gegentiber Isch~imie/Reperfusion als die Kardiomyozyten. Bestimmte quantitative ultrastrukturelle Parameter der Strukturprotektion zeigten statistisch signifikante Korrelationen mit der Isch~imiezeit, andere mit der Anzahl und dem Schweregrad der myozyt/iren oder vaskul~iren Rejektionen im ersten Jahr nach HTx. Infektionen mit dem Zytomegalie-Virus wurden mittels Immunhistochemie und In situ-PCR nachgewiesen, veriinderte Expressionen von Zytokinen und Wachstumsfaktoren mittels Immunhistochemie und In situ-Hybridisierungo Nur durch einen differenzierten Einsatz konventioneller und 8 Zeitschrift fiir Herz-, Thorax-und Gef:,if3chirurgie, Band 11, Supplement i (1997) © Steinkopff Verlag 1997 molekularer Methoden k6nnen unterschiedliche Fragen nach HTx beantwortet werden. Voraussetzung darer ist eine adfiquate Entnahme, Fixierung und Aufarbeitung der jeweiligen Proben.Summary The most important diagnostic questions following HTx relate to graft failure, acute rejection, infections and chronic rejection. Right ventricular biopsies were taken during and following HTx at different time points: a) before cardioplegia, b) immediately following cardioplegia with Custodiol ® and explantation, c) before implantation, d) after 30 and/or 60 rain reperfusion, e) weekly during the first postoperative month and...