Isolierung eines kleinmolekularen Erythrocytenmembran-Proteins durch Anti D-Immunadsorption

Abstract

Nach Hämolyse gewaschener Rh-positiver Erythrocyten und anschließender erschöpfender Dialyse gegen dest. Wasser wurde das Hämo-lysat lyophilisiert, homogenisiert und dialysiert. Aus diesem Diffusat konnte durch Sephadex-Gelfiltration über G 10 eine konstant reproduzierbare kleinmolekulare Proteinfraktion isoliert werden. Durch Immunadsorption an gereinigtem Anti D, gekoppelt mit PABlonenaustauscherceliulose wurde eine Substanz erhalten, deren Proteincharakter durch das IR-Spektrum und den Stickstoffgehalt von 14,6%, die Biuretprobe und die Amidoschwarzanfärbung bewiesen wurde. Das Molekulargewicht lag um 10000. Ein Kohlenhydratanteil konnte nicht nachgewiesen werden. Lecithin, Cholesterin und Triglyceride lagen nicht vor. Eine geringe Konzentration von Lipidphosphor war nachweisbar. In chromatographischen und elektrophoretischen Untersuchungen ergab sich ein einheitliches Protein; nach salzsaurer Hydrolyse waren 14 verschiedene Aminosäuren dünnschichtchromatographisch nachweisbar. Aufgrund der gaschromatographischen Aminosäurenanalysen und Untersuchungen mit dem Aminosäureanalyser fanden wir, daß Lysin die höchste Konzentration der basischen, Asparaginsäure der sauren und Alanin der neutralen Aminosäure hatte. Es unterschied sich aufgrund seines Molekulargewichtes und seiner Aminosäurezusammensetzung bei hohem Lysingehalt von anderen bekannten Serum-und Erythrocytenmembranproteinen. Die Antigen-Charakterisierung wurde mit dem ScHui/rz-DALE-Test durchgeführt; über die Ergebnisse dieser Untersuchungsreihe soll in einer zweiten Mitteilung berichtet werden. Isolation of a low molecular weight erythrocyte membrane protein by anti D immunoadsorptionWashed Rh-positive erythrocytes were haemolysed and the haemolysate was dialysed exhaustively against distilled water, followed by lyophilisation, homogenisation and dialysis. A constantly reproducible, low molecular weight protein fraction was isolated from the final dialysate by gel filtration on Sephadex G 10. Immunoadsorption on purified anti D, coupled with chromatography on PAB-ion exchange cellulose, gave a substance, which was shown to be a protein by its IR spectrum, nitrogen content of 14.6%, biuret test and amidoblack staining. The molecular weight was about 10000. There was no evidence for the presence of carbohydrate, lecithin, cholesterol or triglycerides. A very low concentration of lipid-bound phosphorus was detected. Chromatography and electrophoresis showed an homogeneous protein. After acid hydrolysis, 14 different amino acids were detected by thin layer chromatography. Amino acids analysis by gas liquid chromatography and on the amino acid analyser showed that lysine, aspartic acid and alanine had the highest concentration of the basic, acidic and neutral amino acids, respectively. On the basis of molecular weight and an amino acid composition with a high concentration of lysine, the protein differs from other known proteins from the serum and erythrocyte membrane. The SCHULTZ-DALE test was used for the antigen characterisation; the results from this ser...