Isolation and Culture of Postnatal Stem Cells from Deciduous Teeth

Abstract

RESUMENAntecedentes: Las enfermedades degenerativas representan en la actualidad un problema de salud pública; de ahí que el desarrollo y aplicación de estrategias que permitan restituir parcial o totalmente los tejidos afectados tenga un especial interés en el campo biomédico. Una de las estrategias terapéuticas se basa en el uso de células madre estromales, en particular las provenientes de la pulpa dental. Propósito: Desarrollar un cultivo de células madre estromales a partir de pulpa dental de dientes primarios. Métodos: Se incluyó el aislamiento de células madre estromales de la pulpa dental de dos caninos deciduos extraídos con indicaciones terapéuticas y cultivo en medio D-MEM con SFB al 20 % a 37 o C, y 5% CO 2 , realizando cambios de medio de cultivo cada 3 días y observando cada 7 días. La confluencia del 80-90 % se logró luego de tres semanas. Se realizó la tinción con DAPI y STRO-1 y análisis mediante citometría de flujo y microscopia de fluorescencia. Resultados: Los análisis muestran células adherentes purificadas con morfología fusiforme similar a fibroblastos y aparición de conglomerados semejantes a unidades formadoras de colonias (UFC). El total de la población mostró un 17 % de positividad al STRO-1, mientras que la población de mayor tamaño y más compleja mostró una positividad del 26 %. Asimismo, STRO-1 se localizó preferencialmente en las UFC. Conclusiones: Con el protocolo descrito se logró un cultivo de células madre estromales extraídas de pulpa dental en dientes primarios, como punto de partida para futuros ensayos terapéuticos y su aplicación en la regeneración tisular. PALABRAS CLAVE células cultivadas; células madre; diente primario ÁREAS TEMÁTICAS ingeniería de los tejidos; cultivo de células ABSTRACTBackground: Currently, degenerative diseases represent a public health problem; therefore, the development and implementation of strategies to fully or partially recover of damaged tissues has a special interest in the biomedical field. Therapeutic strategies based on mesenchymal stem cells transplantation from dental pulp have been proposed as an alternative. Purpose: To develop a mesenchymal stem cells culture isolated from dental pulp of deciduous teeth. Methods: The mesenchymal stem cells isolation was performed from dental pulp of two deciduous canines, freshly extracted with therapeutic indication. Specimens were cultured in D-MEM medium with 20% FBS at 37 °C and 5% CO 2 . The medium was changed every three days. 80-90% confluence was achieved after three weeks. Cells were stained with DAPI and STRO-1 and analyzed through flow cytometry and fluorescence microscopy. Results: The analysis showed that adherent cells had a fusiform fibroblast-like morphology and colony forming units (CFUs) were observed. 17% of the whole population was STRO-1+ and 26% of the larger and more complex population was positive to this antigen. Additionally, STRO-1+ cells were localized preferential in UFCs. Conclusions: The protocol described here could be used to enriching mesenchymal stem cells from dent...