Resumo -O objetivo deste trabalho foi desenhar, validar e otimizar pares de iniciadores microssatélites SSR para mamoneira. O desenho dos pares de iniciadores foi feito por meio do aplicativo Websat, a partir de sequências depositadas no GenBank do National Center for Biotechnology Information (GenBank/NCBI), e a sua qualidade foi aferida com uso do aplicativo web NetPrimer. Foram utilizadas diferentes concentrações de DNA, cloreto de magnésio, pares de iniciadores, dNTPs e temperatura de anelamento para otimização das condições de PCR. Um total de 30 pares de iniciadores SSR foi desenhado, sintetizado e otimizado. O gel de agarose foi utilizado para detecção dos produtos amplificados, e o gel desnaturante de poliacrilamida, na otimização das condições de PCR e na identificação de polimorfismo. Os pares de iniciadores apresentaram percentagem média de guanina/citosina (GC) igual a 47,29% e produtos amplificados com tamanhos entre 128 e 381 pb. Vinte e nove pares de iniciadores SSR (96,7%) foram validados, dos quais nove foram polimórficos (23,3%). As concentrações otimizadas para amplificação são: DNA, 25 ng; cloreto de magnésio, 1,2 mmol L -1 ; iniciadores Forward e Reverse, 0,4 mmol L -1 ; dNTPs, 0,1 mmol L -1 ; e temperatura de anelamento, 62 a 64ºC. As ferramentas de bioinformática Websat e Net Primer podem ser utilizadas para desenvolver iniciadores microssatélites de qualidade, para a mamoneira, a partir de sequências depositadas no GenBank/NCBI.Termos para indexação: Ricinus communis, GenBanK/NCBI, genoma.
Design and validation of SSR microsatellite primers for castor beanAbstract -The objective of this work was to design, validate, and optimize pairs of SSR microsatellite primers for castor bean. The design of the primer pairs was done by means of the Websat application from sequences deposited in the GenBank of the National Center for Biotechnology Information (GenBank/NCBI), and its quality was assessed using the NetPrimer web application. Different concentrations of DNA, magnesium chloride, primer pairs, dNTPs, and annealing temperatures were used for the optimization of PCR conditions. A total of 30 primer pairs were designed, synthesized, and optimized. Agarose gel was used for detection of the amplified products, and denaturing polyacrylamide gel for the optimization of PCR conditions and the identification of polymorphism. The primer pairs presented average guanine/cytosine (GC) percentage of 47.29% and amplified fragment sizes varying from 128 to 381 bp. Twenty-nine pairs of SSR primers (96.7%) were validated, of which nine were polymorphic (23.3%). The concentrations optimized for amplification are: DNA, 25 ng; magnesium chloride, 1.2 mmol L -1 ; Forward and Reverse primers, 0.4 mmol L -1 ; dNTPs, 0.1 mmol L -1 ; and annealing temperature, 62 to 64°C. The bioinformatic tools Websat and Net Primer can be used to develop quality microsatellite primers for castor bean from sequences deposited at the GenBank/NCBI.Index terms: Ricinus communis, GenBanK/NCBI, genome.
IntroduçãoO desenvolvimento de mar...