Interaction of annexin A6 with alpha actinin in cardiomyocytes

Abstract

BackgroundAnnexins are calcium dependent phospholipid binding proteins that are expressed in a wide variety of tissues and implicated in various extra- and intracellular processes. In myocardial tissue, annexins A2, A5 and A6 are particularly abundant, of which the expression levels of annexin A6 has been found to be maximal. Conflicting reports from transgenic mice overexpressing annexin A6 or null mice lacking annexin A6 showed imbalances in intracellular calcium turnover and disturbed cardiac contractility. However, few studies have focussed on the signalling module of annexin A6 in the heart either in normal or in pathological state.ResultsTo identify the putative binding partners of annexin A6 in the heart, ventricular extracts were subjected to glutathione S-transferase (GST)- annexin A6 pull down assay and the GST- annexin A6 bound proteins were identified by mass spectrometry. The pull down fractions of ventricular extracts with GST-full length annexin A6 as well as GST-C terminus deleted annexin A6 when immunoblotted with anti sarcomeric alpha (α)-actinin antibody showed the presence of α-actinin in the immunoblot which was absent when GST-N terminus deleted annexin A6 was used for pull down. Overexpression of green fluorescent protein (GFP) tagged full length annexin A6 showed z-line like appearance in cardiomyocytes whereas GFP-N termimus deleted annexin A6 was mostly localized to the nucleus. Overexpression of GFP-C terminus deleted annexin A6 in cardiomyocytes showed aggregate like appearance in the cytoplasm. Double immunofluorescent staining of cardiomyocytes with anti annexin A6 and anti sarcomeric α-actinin antibodies showed perfect co-localization of these two proteins with annexin A6 appearing like a component of sarcomere. Transient knockdown of annexin A6 in cardiomyocytes by shRNA significantly enhances the contractile functions but does not affect the z-band architecture, as revealed by α-actinin immunostaining in shRNA treated cells.ConclusionsIn overall, the present study demonstrated for the first time that annexin A6 physically interacts with sarcomeric α-actinin and alters contractility of cardiomyocytes suggesting that it might play important role in excitation and contraction process.

Differential expression pattern of Annexin A6 in chick neural crest and placode cells during cranial gangliogenesis

“…In chick, Annexin A6 impacts chick cranial neural crest cell migration through effects on the premigratory neural crest cell cadherins Cadherin-6B and N-cadherin during the neural crest cell epithelial-to mesenchymal transition (EMT) [20]. These results are consistent with a known function for Annexin A6 in vitro in cytoskeletal remodeling and cell migration via interactions with the actin cytoskeleton [21, 22] and the actin cross-linking protein α-actinin [23]. Given the documented roles for Annexin A6 in early embryonic events such as neural crest cell EMT, and later processes including ganglia formation and physiology, we aimed to establish a detailed spatio-temporal expression profile for Annexin A6 in the developing chick embryo from neural crest cell EMT through the formation of the cranial trigeminal and epibranchial ganglia.…”

Cytosolic Dynamics of Annexin A6 Trigger Feedback Regulation of Hypertrophy via Atrial Natriuretic Peptide in Cardiomyocytes

“…We have characterized earlier a role of Anxa6 in the regulation of cardiomyocyte contractility (17). Moreover, Anxa6 is also considered to be a negative inotropic factor playing compensatory roles in chronic pathology (18).…”

Doxorubicin-Indused Disturbances of Cardiomyocyte Contractile Activity

“…Так, згідно з літературними даними, доксорубіцин зни-жує кількість SERСA та концентрацію Са 2+ в саркоплазматичному ретикулумі (СПР) [18], підвищує утворення активних форм кисню, що можуть сприяти активації Cа 2+ / кальмодулінзалежної кінази II (CaMKII) і підвищувати витік Cа 2+ з СПР, знижуючи кальцієву керованість кардіоміоцитів [19]. Пригнічення скоротливої функції останніх може пояснюватись також і тим, що у нео-натальних кардіоміоцитів вже через 1 год після дії доксорубіцину втричі підвищується активність кальпаїну, який стимулює де-градацію титину [20], протеоліз еластичної ділянки якого призводить до порушення діастолічної та систолічної функції клітин. Інкубація клітин з куркуміном окремо також погіршувала функціональний стан неонаталь-них кардіоміоцитів порівняно з контролем, що може пояснюватись проапоптотичними властивостями куркуміну [21].…”

“…Зміна показників скоротливої активності неонатальних кардіоміоцитів щурів при використанні доксорубіцину та куркуміну: а-ритмічності скорочень; б-частоти спонтанних скорочень; в-тривалості скорочення і розслаблення; г-амплітуди піка; д-довжини клітин; е-максимальної швидкості скорочення й розслаблення; 1-контроль; 2-після інкубації з доксорубіцином (0,5 мкмоль); 3-з куркуміном (20 мкмоль), 4-при їх спільному застосуванні в тих самих дозах. * Р<0,05 порівняно з контролем, ** Р<0,05 порівняно з дією доксорубіцину Порушення скоротливої активності кардіоміоцитів за дії доксорубіцину менту призводить до порушення зв'язку між синтезом АТФ у мітохондріях і утворенням фосфокреатину [20].…”