Ingeniería del tejido cartilaginoso: aplicación de células troncales mesenquimales derivadas de tejido adiposo y médula ósea para su utilización en regeneración de tejido cartilaginoso

Abstract

INTRODUCCIÓN _________________________________________________ 1.-CARTÍLAGO ARTICULAR _____________________________________ 2.-MENISCO _____________________________________________________ 3.-INGENIERÍA DEL TEJIDO CARTILAGINOSO ________________ 3.1.-Células utilizadas en ingeniería del tejido cartilaginoso _______ 3.1.1.-Condrocitos _____________________________________________________ 3.1.2.-Células troncales ________________________________________________ 3.2.-Criopreservación celular _________________________________________ 3.3.-Matrices utilizadas en ingeniería del tejido cartilaginoso _____ 3.3.1.-Hidrogeles _______________________________________________________ 3.3.2.-Ácido poliláctico _________________________________________________ 3.3.3.-Matrigel ® ________________________________________________________ 3.3.4.-Colágeno ________________________________________________________ OBJETIVOS _______________________________________________________ 1.-GENERALES __________________________________________________ 2.-ESPECÍFICOS ________________________________________________ MATERIALES Y MÉTODOS _______________________________________ 1.-MATERIALES _________________________________________________ Animales ________________________________________________________________ Biomateriales ___________________________________________________________ 2.-OBTENCIÓN DE TEJIDO ADIPOSO Y MÉDULA ÓSEA EN RATA Y CABALLO ________________________________________________________________ 2.1.-Obtención de tejido adiposo de rata ____________________________ 2.2.-Obtención de médula ósea de caballo ___________________________ 2.3.-Obtención de tejido adiposo de caballo _________________________ 3.-AISLAMIENTO DE MSCs ____________________________________________ 3.1.-Aislamiento de BM-MSCs __________________________________________ 3.2.-Aislamiento de AT-MSCs___________________________________________ 4.-TÉCNICAS DE CULTIVO Y EXPANSIÓN DE BM-MSCs Y AT-MSCs _ 4.1.-Cultivo en monocapa _____________________________________________ 4.2.-Cultivo sobre biomateriales _____________________________________ 4.3.-Cultivo en pellet __________________________________________________ 4.4.-Cultivo en micromasa ____________________________________________ 7 Índice 5.-CRIOPRESERVACIÓN CELULAR ____________________________________ 5.1.-Protocolos utilizados en la criopreservación de AT-MSCs de rata __ 6.-CITOMETRÍA DE FLUJO ______________________________________ 6.1.-Determinación de la viabilidad celular __________________________ 6.2.-Caracterización de AT-MSCs de rata mediante marcadores de superficie _______________________________________________________________ 6.3.-Caracterización de las AT-MSCs y BM-MSCs de caballo mediante marcadores de superficie ___________________________________ 7.-TÉCNICAS DE DIFERENCIACIÓN CELULAR _________________ 7.1.-Inducción de la condrogénesis __________________________________ 7.1.1.-Tinción Azul Alcian ______________________________________________ 7.2.-Inducción de la adipogénesis _____________________________...