Daun Pare (M.charantia L.) memiliki banyak manfaat dalam bidang kesehatan. Daun pare (M.charantia L.) merupakan tanaman herbal yang dipercaya dan digunakan sebagai antibakteri. Fraksi n-heksana Daun pare (M.charantia L.) memiliki aktivitas antibakteri terhadap S.epidermidis. Tujuan penelitian ini yaitu untuk mengetahui senyawa metabolit sekunder yang terdapat di dalam fraksi n-heksana ekstrak etanol 96% daun pare (M.charantia L.) dan untuk mengetahui fraksi n-heksana ekstrak etanol 96% daun pare (M.charantia L.) dalam menghambat bakteri S.epidermidis. Jenis penelitian yang dilakukan adalah eksperimental. Proses ekstraksi daun pare (M.charantia L.) menggunakan maserasi dengan pelarut etanol 96% dan fraksinasi menggunakan pelarut n-heksana. Uji skrining fitokimia meliputi flavonoid, alkaloid, saponin, steroid/terpenoid, fenol dan tanin. Pengujian aktivitas antibakteri dengan metode sumuran menggunakan konsentrasi 1%, 2%, 3% dan 4%. Hasil penelitian ini menunjukkan fraksi n-heksana ekstrak etanol 96% daun pare (M.charantia L.) mengandung senyawa flavonoid, alkaloid dan steroid. Fraksi n-heksana ekstrak etanol 96% daun pare (M.charantia L.) memiliki aktivitas antibakteri dalam menghambat bakteri S.epidermidis dalam kategori lemah hingga kuat. Berdasarkan hasil tersebut, dapat disimpulkan bahwa Fraksi n-heksana ekstrak etanol 96% daun pare (M.charantia L.) mampu menghambat bakteri S.epidermidis pada semua konsentrasi dan mempunyai kandungan metabolit sekunder seperti flavonoid, alkaloid dan steroid.