Identification of Dengue Fever Markers by Dot Immunoasay

Abstract

удк 616.98:578.833.25 а.Г. Полтавченко, В.а. Терновой, а.В. ерш, П.В. филатов, р.б. баяндин, а.о. семенцова, л.и. еремеева, В.б. локтев, а.П. агафонов ВыяВление маркероВ лихорадки денге методом дот-иммуноанализа ФБУН «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», п. Кольцово, Российская Федерацияцель. разработка диагностического набора для выявления маркеров лихорадки денге на всех стадиях заболевания. материалы и методы. в сыворотках крови от пациентов с подозрением на лихорадку денге проводили выявление антигена NS1 и специфических IgM и IgG методом иммуно-хроматографии, методом дот-иммуноанализа, иммуноферментного анализа, с использованием коммерческих тест-систем, а также экспериментальным набором «денге-спектр». результаты и обсуждение. разработан диагностический набор для выявления маркеров лихорадки денге, основанный на механизме одновременного дифференциального выявления белка NS1 возбудителя и антител класса IgM и класса IgG с образованием специфических комплексов между маркерами из исследуемого образца и известными иммунореагентами захвата, в определенном порядке дискретно зафиксированными на плотной подложке. установлено, что эффективное выявление специфических IgG и Igм к вирусу денге может быть осуществлено по схеме, при которой захват IgG производится на суммарном антигене вируса с детекцией с помощью меченных антител против IgG человека, а выявление Igм осуществляется захватом на антителах против Igм человека с детекцией меченным суммарным вирусным антигеном. выявление белка NS1 вируса денге может быть выполнено с использованием подложки с иммобилизованными моноклональными антителами к NS1 и иммунозоля золота, связанного с антителами к NS1. при такой постановке дот-анализа лимит определения рекомбинантного аналога белка NS1 составил 100 нг/мл. сравнительные испытания набора на панели клинических образцов показали хорошее совпадение результатов с данными, полученными с использованием импортных коммерческих тестов. разработанный набор может найти применение для скрининга клинических образцов, как в лабораторных, так и в полевых условиях.Ключевые слова: вирус денге, дот-иммуноанализ, иммуноферментный анализ.Abstract. The aim. Development of diagnostic kit for identifying markers of dengue fever at all stages of the disease. Materials and methods. In blood serum from patients with suspected dengue fever, NS1 antigen and specific IgM and IgG were detected by immune chromatography, dot immunoassay, enzyme-linked immunosorbent assay, using commercial test systems, as well as the "Dengue Spectrum" experimental kit. Results and discussion. A diagnostic kit has been developed for the detection of dengue fever markers, based on the mechanism of simultaneous differential detection of the agent NS1 protein and IgM and IgG class antibodies with the formation of specific complexes between markers from the test sample and known capture immune reagents, in a certain order, discretely fixed on a dense substrate. It was found that the effective detection of specific IgG and IgM to dengue virus c...