RESUMONesse manuscrito são discutidos aspectos relevantes sobre desenvolvimento da técnica de hibridização fluorescente in situ, seus princípios básicos, aplicações e perspectivas em medicina veterinária. Além disso, compara as vantagens e desvantagens em relação às outras técnicas de diagnóstico in situ. A FISH demonstra ser uma técnica com grande potencialidade de uso rotineiro, pois associa agilidade de execução, alta sensibilidade e especificidade e visualização do agente infeccioso viável no tecido.PALAVRAS-CHAVE: Diagnóstico in situ, sonda, rRNA, fluorescência.
ABSTRACT FLUORESCENT IN SITU HYBRIDIZATION: BASIC PRINCIPLES AND PERSPECTIVES FOR DIAGNOSING INFECTIOUS DISEASES IN VETERINARY MEDICINE.The present study presents a review of the development of the fluorescent in situ hybridization technique, its basic principles, applications and perspectives in veterinary medicine. It furthermore compares the advantages and disadvantages in relation to other in situ diagnostic techniques. The FISH technique proves to be one with great potential for routine use insofar as it offers speed coupled with high sensitivity and specificity, while providing for the visualization of the infectious agent in tissue.KEY WORDS: in situ diagnosis, probe, rRNA, fluorescence.Eficácia e agilidade no diagnóstico sempre foram preocupações de técnicos veterinários a fim de controlar doenças em diversas espécies animais. Além da identificação do agente, o conhecimento da patogenia e a resposta imunológica do hospedeiro são importantes para o direcionamento das ações na prevenção de doenças.Métodos convencionais de isolamento e identificação de micro-organismos envolvem propagação in vitro do agente que pode apresentar limitações quanto à sensibilidade e especificidade, possibilidade de erros metodológicos, necessidade de cultivos em meios especiais, ou até mesmo estar impossibilitado no caso de agentes não-cultiváveis, tratamentos prévios com antimicrobianos ou presença de microbiota bacteriana competitiva. Além disso, o isolamento pode apresentar riscos a quem executa essa tarefa pela característica zoonótica de alguns micro-organismos. Outro empecilho relacionado aos métodos convencionais refere-se às dificuldades de recebimento das amostras em prazo adequado para isolamento devido às grandes distâncias e transporte dificultado pela necessidade de conservação do material, especialmente para exames bacteriológicos, que não devem ultrapassar 24 horas até a chegada ao laboratório (Wolcot, 1992;Boye et al., 2006).Técnicas baseadas na reação em cadeia da polimerase (PCR) facilitaram a detecção rápida e sensível de bactérias independente de serem ou não cultiváveis. No entanto, estas técnicas não oferecem informações sobre a distribuição espacial dos microorganismos no tecido ou sua associação com a lesão. As provas sorológicas também ocuparam lugar de destaque no diagnóstico de doenças, porém, podem não diferenciar resposta imune vacinal e infecciosa, não são capazes de detectar anticorpos em estágios iniciais da doença, além de apresenta...