AGRADECIMENTOSPrimeiramente quero agradecer a minha querida família, que foi quem me forneceu todo o suporte necessário para chegar até aqui. Mãe, Pai, Angela e Marcia muito obrigado por sempre estarem presentes na minha vida, eu os amo infinitamente. Ao meu amado "namorido" Júlio que fez parte desses ótimos 4 anos de doutorado e contribuiu imensamente para meu crescimento. Ensinou-me muita coisa, promoveu momentos inesquecíveis, permitiu realização de sonhos e continua me fazendo feliz a cada dia! Amo você! Aos meus queridos cunhados, Evandro e Dio, obrigado por fazerem parte da família e aos meus amados e insubstituíveis sobrinhos: Kauet, Isabela, Inaiá e Henry obrigado por me ensinarem coisas novas sempre.Aos meus companheiros Sussu e Joci que foram meus grandes amigos de todas as horas, principalmente quando o assunto era "smirnoff" ou mesmo só um cafezinho... Voces dois foram essênciais para minha vida estes anos de doutorado, não posso descrever a alegria de ter convivido com vocês.Aos "antigos" (porém não velhos) amigos da biofísica, As minhas novas amizades da Enfermagem que tornam minhas noites mais prazerosas, proveitosas e por fazerem parte da realização de um sonho antigo.As minhas amadas amigas, que mesmo estando longe, fazem parte da minha vida: , pela oportunidade e orientação.
Palavras-chave: Centrinas, Proteínas ligantes de cálcio, Formação de filamentos, Domínio "EF-Hand", Blastocladiella emersonii. ABSTRACT CAMARGO, A. I. Structural and Thermodynamics Studies of Blastocladiella Emersonii Centrins. 2011. 119p. Tese (Doutorado) -Instituto de Física de São Carlos, Universidade de São Paulo, São Carlos, 2011.Centrin proteins are essential component of the microtubule organizing centers in a large range of organisms. They belong to the EF-Hand calcium binding proteins family e can be divided in two subfamilies: one defined by the green algae Chlamydomonas reinhardtii CrCenp, related to contractile functions and the other centrin of the yeast Saccharomices cerevisiae ScCdc31p, related to duplication of centrossome mitotic centers. Interesantly, Blastocladiella emersonii fungus posses two centrin forms in it genome: BeCen1 closely related to CrCenp and BeCen3 closely related to ScCdc31p. All other known fungus have only one form of centrin: ScCdc31p. With this curious finding, described in 2005, compared structural and thermodynamics studies between recombinant proteins BeCen1 and BeCen3 were performed, in attempt to identify relevant differences that could explain the presence of two forms of centrins in this fungus. Both centrins were expressed in E. coli and purified by chromatography resulting in 5mg/l protein yield. Structural analyses were performed with circular dichroism (CD), fluorescence, light scattering (DLS AND RALS), atomic force microscopy (AFM) and transmission electronic microscopy (TEM). Using isothermal titration calorimetry (ITC) thermodynamics parameters about the calcium binding were defined. Both showed alpha helix predominant content and structural physical-chemistry difference...