Mastite bovina é enfermidade que acomete a glândula mamária de vacas, acarretando grandes prejuízos econômicos devido à diminuição da produção leiteira e ao gasto com uso de medicamentos. O objetivo do presente trabalho realizado em propriedades rurais, no município de Promissão, região Noroeste do Estado de São Paulo, foi verificar a situação sanitária dos rebanhos, visando implementar melhorias na sanidade dos animais, na qualidade microbiológica do leite e na produtividade, a fim de agregar valor comercial ao produto final. Foram coletadas 228 amostras de leites de 113 animais que apresentaram aumento da celularidade no teste CMT (California Mastits Test). No cultivo microbiológico foram isoladas 195 colônias, sendo: 59,5% Staphylococcus aureus (116/195), 5,6% S. chromogenes (11/195), 2,0% Corynebacterium bovis (4/195), 1,0% de colônias de Pasteurella multocida (2/195), além de outros microrganismos em associação. Do total de amostras, 14,5% (33/228) não apresentou crescimento bacteriano. Pela técnica de MALDI-TOFpara confirmação das espécies de Staphylococcus e Streptococcus foi possível identificar S. chromogenes, S. intermedius, S. epidermidis, S. haemolyticum, S borealis e S. aureus. O gênero Streptococcus foi caracterizado como S. dysgalactiae, S. agalactiae e S. uberis.