Growth Characteristics of Nonmalignant Cells in the ATP Cell Viability Assay

Abstract

Over the last 5 years, the ATP cell viability assay (ATP-CVA) has been used to study the in vitro response of cell lines and fresh gynecologic human tumors to a variety of antineoplastic agents including chemotherapeutic agents, hormones and biological response modifiers. This assay measures light production as intracellular ATP interacts with the luciferin-luciferase complex. Quantitation of the light produced has been shown to directly correspond with the number of viable cells. A past criticism is that in the ATP-CVA, when applied to fresh tumor tissue, normal cells (fibroblasts, macrophages and lymphocytes) also produce ATP, and if present in sufficient numbers, could lead to errors in chemosensitivity testing results. This study was designed to evaluate the growth characteristics of various benign cells found in fresh tumors. The cells were studied under multiple plating conditions to show the relative increase or decrease of fractional ATP measured at different time points. We found that agar/McCoy underlayer and agarose-coated wells do not permit the growth of nonmalignant cells. In the culture conditions of the ATP-CVA, nonmalignant cells do not contribute relevant ATP levels when treated samples are compared to controls on day 6. Therefore, results of the ATP-CVA in fresh tumors should not be affected.

Heterogeneity ofin vitro chemosensitivity in perioperative breast cancer cells to mitoxantroneversus doxorubicin evaluated by a microplate ATP bioluminescence assay

“…It compares favorably with the 27 % and 52 % evaluability rates reported using the clonogenic assay [39,40]. During the 5-7 day incubation period, we observed a mean 32.7% increase in tumor cell content due to the use of selective medium and non-adherence [31,41]. The ATP-TCA thus provides a method for investigation and comparison of single agent chemosensitivity in situations where it would be unjustified to use these agents clinically.…”

Comparative Chemosensitivity Profiles in Three Human Breast Cancer Cell Lines with the ATP-Cell Viability Assay

“…30, 33], The presented findings in cell lines encouraged us to eval uate drug effects in fresh human tumors as well. The methodology of the assay for fresh human breast cancer specimens needed significant changes because of a differ ent biology and different conditions in fresh tumors such as prevention of overgrowth of nonmalignant cells, disag gregation, and culture techniques [31]. The preliminary data of 61 fresh human breast cancer specimens with 17 in vitro/in vivo correlations tested with the ATP-CVA showed a sensitivity of 90% and a specificity of 86% [32], These facts make this in vitro test a promising new meth od for further clinical evaluation.…”

Quantitative Erfassung der Dosis-Wirkungs-Beziehungen der Zytostatika Taxol und Cisplatin an Ovarialkarzinomzellen miteinem Bioassay im Vergleich zur Zytomorphologie

“…[16,17], Am Tag 6 wurde nur die erste Platte lysiert und das intrazelluläre ATP bestimmt. Die zweite Platte diente der morphologischen Analyse der Zellen direkt in der Probe unter den standar disierten Kulturbedingungen [11], Wir verwendeten BG-1-Ovarialkarzinomzellen, da diese Zellinie mit dem ATP-CSA gut untersucht ist. Petru et al [10] zeigten, dass diese Zellinie gegen DDP resistent ist, ein Befund, den wir in unserer Auswertung bestätigen konnten.…”

“…die relative Zytotoxizität mit dem ATP-Assay relativ ein fach, präzis und reproduzierbar bestimmt werden kann [7,10], Die Zytotoxizitätsmessung mit diesem Prinzip ist sowohl an Zellinien als auch an Frischtumoren möglich. Für Frischtumoruntersuchungen muss der ATP-CSA me thodisch wenig verändert werden [11]. Vor allem müssen aber die genau definierten Kultivierungsbedingungen für Frischtumoren eingehalten werden [11].…”

“…Für Frischtumoruntersuchungen muss der ATP-CSA me thodisch wenig verändert werden [11]. Vor allem müssen aber die genau definierten Kultivierungsbedingungen für Frischtumoren eingehalten werden [11]. In der vorliegen den Studie wurden deshalb Zellinien verwendet, weil da mit die Experimente beliebig wiederholt und die Resultate verifiziert werden konnten.…”