G-Quadruplex Aptamer-Ligand Characterization

Abstract

In this work we explore the structure of a G-rich DNA aptamer termed AT11-L2 (TGGTGGTGGTTGTTGTTGGTGGTGGTGGT; derivative of AT11) by evaluating the formation and stability of G-quadruplex (G4) conformation under different experimental conditions such as KCl concentration, temperature, and upon binding with a variety of G4 ligands (360A, BRACO-19, PDS, PhenDC3, TMPyP4). We also determined whether nucleolin (NCL) can be a target of AT11-L2 G4. Firstly, we assessed by circular dichroism, UV and NMR spectroscopies the formation of G4 by AT11-L2. We observed that, for KCl concentrations of 65 mM or less, AT11-L2 adopts hybrid or multiple topologies. In contrast, a parallel topology predominates for buffer containing 100 mM of KCl. The Tm of AT11-L2 in 100 mM of KCl is 38.9 °C, proving the weak stability of this sequence. We also found that upon titration with two molar equivalents of 360A, BRACO-19 and PhenDC3, the G4 is strongly stabilized and its topology is maintained, while the addition of 3.5 molar equivalents of TMPyP4 promotes the disruption of G4. The KD values between AT11-L2 G4, ligands and NCL were obtained by fluorescence titrations and are in the range of µM for ligand complexes and nM when adding NCL. In silico studies suggest that four ligands bind to the AT11-L2 G4 structure by stacking interactions, while the RBD1,2 domains of NCL interact preferentially with the thymines of AT11-L2 G4. Finally, AT11-L2 G4 co-localized with NCL in NCL-positive tongue squamous cell carcinoma cell line.

Avaliação da composição corporal por DEXA em atletas de Desportos de Combate

“…As práticas utilizadas para a redução de massa corporal são muito variadas: restrição dietética (visando energia total ou macronutrientes específicos), desidratação intencional, aumento do exercício, uso de agasalhos e sacos plásticos, jejum no dia anterior à pesagem, indução de vómito, consumo de pílulas dietéticas e uso de laxantes e diuréticos (2,7,8). Estas práticas constituem um risco para a saúde dos atletas especialmente aqueles que não têm um bom entendimento de nutrição pois foi demonstrado que são mais propensos a recorrer a jejum extremo e desidratação para perder peso (9).…”

“…Estas práticas constituem um risco para a saúde dos atletas especialmente aqueles que não têm um bom entendimento de nutrição pois foi demonstrado que são mais propensos a recorrer a jejum extremo e desidratação para perder peso (9). Além disso, estas práticas começam a ser utilizadas de forma precoce e geralmente durante a puberdade, o que pode afetar o crescimento e desenvolvimento dos jovens praticantes (8).…”

“…As pesagens oficiais são normalmente feitas 24 horas antes dos combates pelo que os atletas tentam recuperar a massa corporal perdida imediatamente após a pesagem. Este ciclo de "ganhar-perder" peso, comumente chamado de weight-cycling é bastante comum e acarreta inúmeros riscos para a saúde quando usado de forma regular, nomeadamente disfunções do sistema cardiovascular e interrupção temporária do crescimento (2,8).…”

“…Assim, torna-se de extrema importância que os atletas apresentem baixos valores de massa gorda. A avaliação por DEXA, mostrou ser eficaz na avaliação da massa gorda, massa magra e conteúdo mineral ósseo, apresentando uma margem de erro muito baixa (8).…”

“…Vários estudos demonstraram que os desportos de combate podem ajudar os atletas a aumentar a sua densidade mineral óssea, no entanto quando associado a treino excessivo e má nutrição pode levar à RED-S (Relative Energy Deficiency in Sport) que é uma condição que impacta negativamente a saúde óssea. O acompanhamento dos atletas com o uso da DEXA pode ajudar na monitorização do risco de lesão uma vez que a densidade mineral óssea é usada como um marcador indireto de osteoporose e risco de fratura (2,3,8). Embora a DEXA seja um método bastante preciso e completo, possui também algumas desvantagens quando comparada com outros métodos antropométricos.…”