O presente trabalho teve como objetivo estudar o fungo Rhizopus microsporus UCP 1296 isolado do solo da Caatinga enfatizando o desenvolvimento e aplicação de processos biotecnológicos para produção de uma nova colagenase. Para tanto, parâmetros fermentativos significantes como: temperatura, pH, meio de cultura e tempo de fermentação foram avaliados. Amostras do microrganismo foram mantidas a 4 °C em meio ágar extrato de malte. O micélio foi suspenso em 5 mL de uma solução composta de NaCl e Tween 80. Após a inoculação feita com a suspensão de esporos contendo 150 µL (106 esporos/mL), foi realizada a fermentação submersa em frascos Erlenmeyer contendo 250mL de gelatina. Uma curva de crescimento foi desenvolvida para identificar o melhor tempo de produção da enzima. Os resultados que a produção da colagenase ocorreu com 120 horas de fermentação, obtendo-se 550 U/mL de atividade colagenolítica e biomassa 0,42 g/L na fase estacionária, indicando que a colagenase produzida é um metabólito secundário. Um planejamento fatorial 24 foi realizado para selecionar os melhores parâmetros onde foi avaliada a influência das variáveis: temperatura (ºC), pH, agitação e concentração do substrato (gelatina). Com o resultado do planejamento fatorial obtivemos um aumento da produção enzimática cerca de 32%. Este é o primeiro estudo que descreve condições otimizadas de produção de colagenase por cepas de R. microsporus.