FLT3 receptor/CD135 expression by flow cytometry in acute myeloid leukemia: Relation to FLT3 gene mutations and mRNA transcripts

Mekawy, Mohamed; Eissa, Deena Samir; Hamza, Mahmoud A.; Hamed, Gehan Mostafa; Youssef, Mariam

doi:10.1016/j.ejmhg.2018.04.006

Cited by 3 publications

(2 citation statements)

References 23 publications

Supporting

Mentioning

Contrasting

Unclassified

Order By: Relevance

“…Therefore, designing and implementing a scheme for the simultaneous detection of specific antigen groups on exosome could help in more precise molecular typing of AML. Expression levels of CD markers such as CD9, CD34, CD117, CD123, and CD135 in patients with AML are significantly different from those in normal individuals which are the hallmark for the diagnosis of AML. − Hence, we aim for the simultaneous detection of these CD molecules on leukemia cell derived exosomes. In this regard, we explored polymerase chain reaction-amplified immunoassay (I-PCR), a strategy that combines the specificity of an immunological recognition technique with the exponential amplification capacity of PCR by utilizing an antibody tagged with a reporter DNA fragment as an alternative of the antibody enzyme conjugate used in ELISA.…”

mentioning

confidence: 99%

Simultaneous Detection of a Cluster of Differentiation Markers on Leukemia-Derived Exosomes by Multiplex Immuno-Polymerase Chain Reaction via Capillary Electrophoresis Analysis

et al. 2020

View full text Add to dashboard Cite

Acute myeloid leukemia (AML) is a heterogeneous disease, and there are critical interests in detecting multiple biomarkers as a single biomarker detection cannot reflect the exact phase of the disease. Exosomes derived from different types of AML cells contain respective combinations of cluster of differentiation (CD) markers that may be used to guide the molecular typing of AML in the clinic. Here, aiming to build more precise molecular typing of AML, we demonstrate multiplex immuno-PCR (mI-PCR) assay for simultaneous detection of multiple surface CDs on exosomes of AML via capillary electrophoresis with laser-induced fluorescence (CE-LIF). This method comprises of four steps: (1) chemical attachment of reporter DNA sequence to the specific detection antibodies, (2) binding of the detection antibodies to their targets on the exosomes, (3) DNA amplification of the reporter DNA, and (4) capillary electrophoresis analysis of the PCR products. With the method, we first realized simultaneous detection of five target CD molecules (CD9, CD34, c-Kit/CD117, CD123, and FLT-3/CD135) on leukemia cell-derived exosomes with high detection sensitivity. The limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) are 2.41 ± 0.04 particles/μL and 8.02 ± 0.16 particles/μL, respectively, for leukemia cell-derived exosomes. This mI-PCR is found sensitive enough to detect picogram (10–12) levels of protein concentrations with high recovery (95%) in spiked serum sample experiments. We thus anticipate that the proposed method is promising in sensitive detection of multitargets to assist in the precise molecular typing of many complex diseases.

show abstract

mentioning

confidence: 99%

Simultaneous Detection of a Cluster of Differentiation Markers on Leukemia-Derived Exosomes by Multiplex Immuno-Polymerase Chain Reaction via Capillary Electrophoresis Analysis

et al. 2020

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

“…Υπάρχει, ωστόσο, συζήτηση για την εκτίμηση της θετικότητας των αποτελεσμάτων με κυτταρομετρία ροής σε αρκετές από αυτές τις μελέτες(Falini, Martelli, Bolli et al, 2011• Oelschlaegel, Koch, Mohr et al, 2010.Επίσης, έγινε προσπάθεια ανίχνευσης με κυτταρομετρία ροής της επιφανειακής έκφρασης του CD135 δηλαδή του υποδοχέα του FLT3. Φαίνεται ότι η ένταση της έκφρασης του CD135 είναι πολύ υψηλή στην M5 κατά FAB(Kuchenbauer, Kern, Schoch et al, 2005).Σε άλλη μελέτη, η υψηλή έκφραση του CD135 συσχετίστηκε πάλι με τους ΟΜΛ Μ5 αλλά και με τους θετικούς ασθενείς FLT3/ITD με υψηλή ευαισθησία αλλά χαμηλή ειδικότητα(Mekawy, Eissa, Hamza, Hamed, & Youssef, 2018).ΜΕΡΟΣ Β': ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΟ Εισαγωγή…”

unclassified

Μελέτη Της Οξείας Μυελογενούς Λευχαιμίας Και Των ΜΔΣ Συνδρόμων Με Κυτταρομετρία Ροής Και Μοριακές Τεχνικές

Τζιότζιου¹

View full text Add to dashboard Cite

Η διάγνωση της ΟΜΛ και των ΜΔΣ βασίζεται στον συνδυασμό των μορφολογικών, ανοσοφαινοτυπικών, κυτταρογενετικών και μοριακών ευρημάτων. Σε αρκετές μελέτες, ο ανοσοφαινότυπος έχει συσχετιστεί τόσο με τη μοριακή εκτροπή όσο και με την πρόγνωση, ωστόσο τα αποτελέσματα παραμένουν αμφιλεγόμενα. Επιπλέον, έχουν αναφερθεί ορισμένες προσπάθειες για τον προσδιορισμό ορισμένων μοριακών διαταραχών, μέσω ανοσοφαινοτυπικών δεικτών, αλλά με αμφιλεγόμενη επιτυχία. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν η συσχέτιση των ανοσοφαινοτυπικών χαρακτηριστικών και μοριακών μεταλλάξεων στους ασθενείς με ΟΜΛ και ΜΔΣ καθώς και η και σύγκριση σχετικών προγνωστικών παραγόντων. Επιπλέον, διεξήχθη μια προσπάθεια να αναπτυχτεί μια κυτταρομετρική μέθοδος διερεύνησης της έκφρασης των πρωτεϊνών των μεταλλαγμένων γονιδίων ΝΡΜ1 και FLT3 τόσο στην επιφάνεια όσο και στο κυτταρόπλασμα των αώρων κυττάρων της μυελικής σειράς. Στη μελέτη αυτή, συμπεριλήφθηκαν 94 ασθενείς με νεοδιαγνωσθέντα μυελοειδή νεοπλάσματα (ΟΜΛ-ΜΔΣ). Επισημαίνεται ότι οι ασθενείς με οξεία προμυελοκυτταρική λευχαιμία αποκλείστηκαν από την μελέτη. Οι μεταλλάξεις FLT3 και ΝΡΜ1 ανιχνεύθηκαν με αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) και τριχοειδική ηλεκτροφόρηση. Η ανοσοφαινοτυπική ανάλυση διεξήχθη με πολυπαραμετρική κυτταρομετρία ροής με καθορισμένο πάνελ μονοκλωνικών αντισωμάτων, σε δείγματα περιφερικού αίματος ή μυελού των οστών. Το αντίσωμα νουκλεοφωσμίνης (NPM1) και FLT3 (CD135) χρησιμοποιήθηκαν για τις ανοσοφαινοτυπική ανιχνεύση των μεταλλάξεων. Από τη μελέτη αυτή, βρέθηκε ότι ασθενείς με χαμηλή έκφραση ή χωρίς έκφραση αώρων κυτταρικών δεικτών, όπως τα CD34, CD117, HLADR, και υψηλή έκφραση πιο ώριμων δεικτών, όπως το CD11b, βρέθηκαν θετικοί για την μετάλλαξη NPM1. Σε ασθενείς με χαμηλή η καθόλου έκφραση των CD34, CD117, HLADR βρέθηκαν, επιπλέον, μεταλλάξεις του FLT3. Η υψηλή έκφραση του CD11b έχει συσχετιστεί με κακή πρόγνωση σε ομάδα ασθενών χωρίς κυτταρογενετικές και μοριακές διαταραχές και ο συνδυασμός των τριών μεταλλάξεων συσχετίζεται, επίσης, με κακή πρόγνωση. Η παρουσία της έκτοπης έκφρασης του CD7 βρέθηκε σε ασθενείς με FLT3 αλλά όχι NPM1 μετάλλαξη. Οι ασθενείς με μυελοδυσπλασικό σύνδρομο είχαν σημαντικά υψηλότερο CD34 MFI, σημαντικά υψηλότερο ποσοστό των διπλά θετικών CD34/117 καθώς και σημαντικά υψηλότερη τιμή στα CD13, σε σύγκριση με τους ασθενείς με οξεία μυελογενή λευχαιμία. Συμπερασματικά, η κυτταρομετρική ανίχνευση κοινών φαινοτυπικών δεικτών στην ΟΜΛ και στα ΜΔΣ προσφέρει ενδείξεις σχετικά με την παρουσία NPM1 και FLT3 μεταλλάξεων, που συνδέονται με την πρόγνωση .Επίσης η θετικότητα κάποιων έκτοπων λεμφικών δεικτών φαίνεται να συσχετίζεται με την παρουσία ή την απουσία αυτών των μεταλλάξεων.

show abstract

Comprehensive review and evaluation of computational methods for identifying FLT3-internal tandem duplication in acute myeloid leukaemia

Yuan

Han

et al. 2021

Briefings in Bioinformatics

View full text Add to dashboard Cite

Internal tandem duplication (ITD) of FMS-like tyrosine kinase 3 (FLT3-ITD) constitutes an independent indicator of poor prognosis in acute myeloid leukaemia (AML). AML with FLT3-ITD usually presents with poor treatment outcomes, high recurrence rate and short overall survival. Currently, polymerase chain reaction and capillary electrophoresis are widely adopted for the clinical detection of FLT3-ITD, whereas the length and mutation frequency of ITD are evaluated using fragment analysis. With the development of sequencing technology and the high incidence of FLT3-ITD mutations, a multitude of bioinformatics tools and pipelines have been developed to detect FLT3-ITD using next-generation sequencing data. However, systematic comparison and evaluation of the methods or software have not been performed. In this study, we provided a comprehensive review of the principles, functionality and limitations of the existing methods for detecting FLT3-ITD. We further compared the qualitative and quantitative detection capabilities of six representative tools using simulated and biological data. Our results will provide practical guidance for researchers and clinicians to select the appropriate FLT3-ITD detection tools and highlight the direction of future developments in this field. Availability: A Docker image with several programs pre-installed is available at https://github.com/niu-lab/docker-flt3-itd to facilitate the application of FLT3-ITD detection tools.

show abstract

FLT3 receptor/CD135 expression by flow cytometry in acute myeloid leukemia: Relation to FLT3 gene mutations and mRNA transcripts

Cited by 3 publications

References 23 publications

Simultaneous Detection of a Cluster of Differentiation Markers on Leukemia-Derived Exosomes by Multiplex Immuno-Polymerase Chain Reaction via Capillary Electrophoresis Analysis

Simultaneous Detection of a Cluster of Differentiation Markers on Leukemia-Derived Exosomes by Multiplex Immuno-Polymerase Chain Reaction via Capillary Electrophoresis Analysis

Μελέτη Της Οξείας Μυελογενούς Λευχαιμίας Και Των ΜΔΣ Συνδρόμων Με Κυτταρομετρία Ροής Και Μοριακές Τεχνικές

Comprehensive review and evaluation of computational methods for identifying FLT3-internal tandem duplication in acute myeloid leukaemia

Contact Info

Product

Resources

About