Candidatus Phytoplasma mali' was detected, for the first time, in plum (Prunus domestica L.) trees, with symptoms of plum decline in Tunisia. Infected trees showed leaf browning, leaf and fruit wilting followed by tree death in a few weeks. Phytoplasma was detected by polymerase chain reaction (PCR) using universal phytoplasma primer pairs P1/P7. A band with expected size was observed in samples collected from symptomatic, but not symptomless, plum trees. PCR using group-specific primers yielded a band of 1050 bp with 16SrX group specific primers fO1/rO1. Universal PCR products (1.8 kb) were used for restriction fragment length polymorphism analysis (RFLP) after digestion with endonuclease SspI. RFLP patterns obtained were similar to those previously reported for the Apple Proliferation phytoplasma (AP, 16SrX-A), the causal agent of apple proliferation disease. Blast analysis revealed that universal PCR sequences obtained from the infected Tunisian plums were identical and had the highest identity (99%) with the sequence of 'Ca. Phytoplasma mali'. Phylogenetic analysis based on 16S rDNA gene sequences showed that the plum decline phytoplasma strain from Tunisia clustered with 'Candidatus Phytoplasma mali' strains. This is the first report on detection of 16S rDNA of 'Ca. Phytoplasma mali' in plum decline in Tunisia.
Résumé:Candidatus Phytoplasma mali a été détecté pour la première fois sur les pruniers (Malus domestica L.) par l'apparition des symptômes du dépérissement en Tunisie. Chez les arbres infectés, les feuilles brunissaient puis ces dernières ainsi que les fruits flétrissaient et, au bout de quelques semaines, les arbres mouraient. Phytoplasma a été détecté par réaction en chaîne de la polymérase (PCR) au moyen de pairs P1/P7 d'amorces universelles spécifiques des phytoplasmes. Une bande de largeur attendue a été observée dans les échantillons collectés sur des pruniers symptomatiques, mais pas sans symptômes. La méthode PCR avec amorces spécifiques du groupe a produit une bande de 1 050 bp avec les amorces f01/r01 spécifiques du groupe 16SrX. Les produits (1,8 kb) de la PCR universelle ont servi à l'analyse du polymorphisme de longueur des fragments de restriction (RFLP) après digestion par endonucléase SspI. Les motifs obtenus de l'analyse RFLP étaient semblables à ceux rapportés pour le phytoplasme de la prolifération du pommier (AP, 16SrX-A), agent causal de la prolifération du pommier. L'analyse BLAST a révélé que les séquences, obtenues par PCR universelle, des pruniers tunisiens infectés étaient identiques et possédaient le taux d'identité le plus élevé (99%) par rapport à la séquence du Ca. Phytoplasma mali. L'analyse phylogénétique, basée sur les séquences du gène 16S de l'ADN-r a montré que les souches tunisiennes responsables du dépérissement du prunier appartiennent au même groupe que Candidatus Phytoplasma mali. Il s'agit du premier rapport traitant de la détection du gène16S de l'ADN-r de Ca. Phytoplasma mali quant au dépérissement du prunier en Tunisie.