Exprimierte enzymatische Ligation zur Semisynthese chemisch modifizierter Proteine

Abstract

Enzymatische Synthese und exprimierte Proteinligation werden hier zur Proteinsynthese kombiniert, wobei Proteinthioester mit spezifischen Abgangsgruppen von der Protease V8 aus Staphylococcus aureus zur Bildung von Peptidbindungen genutzt werden. Auf diesem Weg wurden Fluoreszenz‐markierte Analoga des Pro‐Neuropeptids Y synthetisiert.

Chemoselektive Ligations‐ und Modifikationsstrategien für Peptide und Proteine

“…Ein solcher Ansatz ist die von Beck-Sickinger et al entwickelte exprimierte enzymatische Ligation (EEL), die für die Synthese des Prähormons Neuropeptid Y (199; 69 Aminosäuren) aus zwei Peptidfragmenten verwendet wurde (Schema 33 C). [273] …”

Genetically Encoded Photocrosslinkers as Molecular Probes To Study G‐Protein‐Coupled Receptors (GPCRs)

“…However, in many cases it may be necessary to combine or replace a suppressor-based methodology with other approaches [17] including SNAP-tag technology, FlaSH-tag approaches, GFP fusions, classical Cys modifications, [18] and even semisynthetic methods such as expressed enzymatic or native protein ligations. [19] For example, ncAA approaches are not suitable when backbone modifications are examined, pulsechase experiments are required, large nonnatural segments need to be introduced, when protein immobilization is required or when subsequent modification may not work owing to low concentrations. Therefore, despite the current success, this is just the beginning of an emerging field that requires chemistry compatible with biological systems.…”

Genetisch kodierte Photovernetzer als molekulare Sonden zur Untersuchung von G‐Protein‐gekoppelten Rezeptoren (GPCR)

“…[16] Nicht zuletzt ist der Einbau von nkAS, die als bioorthogonale chemische Gruppen und biophysikalische Sonden fungieren, für biologische Studien das Mittel der Wahl, wenn diese für die Visualisierung oder Spektroskopie benç-tigt werden. Trotzdem wird es in vielen Fällen notwendig sein, eine suppressorbasierte Methode mit anderen Ansätzen [17] wie der SNAP-Tag-Technik, FlaSH-Tag-Methoden, GFPFusion, klassischen Cys-Modifikationen [18] und sogar semisynthetischen Methoden wie Proteinligationen [19] zu kombinieren oder sie ganz zu ersetzen. Dies gilt z.…”