Expression, purification, crystallization and preliminary X-ray diffraction analysis of the pectin methylesterase from the sugar cane weevilSphenophorus levis

Abstract

Pectin methylesterase removes the methyl groups from the main chain of pectin, the major component of the middle lamella of the plant cell wall. The enzyme is involved in plant cell-wall development, is part of the enzymatic arsenal used by microorganisms to attack plants and also has a wide range of applications in the industrial sector. Therefore, there is a considerable interest in studies of the structure and function of this enzyme. In this work, the pectin methylesterase from Sphenophorus levis was produced in Pichia pastoris and purified. Crystals belonging to the monoclinic space group C2, with unit-cell parameters a = 122. 181, b = 82.213, c = 41.176 Å , = 97.48 , were obtained by the sittingdrop vapour-diffusion method and an X-ray diffraction data set was collected to 2.1 Å resolution. Structure refinement and model building are in progress.

Estudos funcionais e estruturais de pectinases e xilanases com potencial para aplicações biotecnológicas

“…Essas enzimas são geralmente sintetizadas por bactérias, leveduras, fungos, plantas e por alguns insetos herbívoros como verificado em estudos recentes. [28][29][30] As pectinases vegetais estão relacionadas com mudanças ocorrentes ao longo da expansão celular e fundamentalmente no crescimento e amadurecimento dos frutos. 31 As pectinases de microorganismos estão relacionadas com processos de infecção, definindo seu potencial de patogenicidade, 32 e as de insetos estão provavelmente vínculadas com seu potencial de herbivoria.…”

“…28,33,35 Os plasmídios resultantes foram construídos para expressar a proteína-alvo fusionada, em seu C-terminal, a um c-myc epitope, usado em ensaios de imunodetecção, mais uma cauda de histidina (6xHis-tag), usada na purificação da proteína. 28,33,35 Os clones da levedura P. pastoris expressores das enzimas recombinantes Sl-PME e Sl-EndoPG foram gentilmente cedidos ao nosso grupo pelo Prof. Dr. Flavio Henrique Silva para realização dos estudos estruturais das Sl-Pectinases que serão descritos neste capítulo.…”

“…28 Os dados foram indexados assumindo uma estrutura monoclínica C-centrada e, após integração, as reflexões…”

“…Um resumo dos parâmetros de processamento das imagens de difração e refinamento da estrutura cristalográfica encontra-se na Tabela 16. Assumindo uma única molécula com 28 …”