Expression and characterization of camel chymosin in Pichia pastoris

Wang, Nan; Wang, Kevin Yueju; Zhang, Rongquan; Guo, Wenfang; Liu, Dehu

doi:10.1016/j.pep.2015.03.012

Cited by 33 publications

(29 citation statements)

References 28 publications

Supporting

Mentioning

Contrasting

Unclassified

Order By: Relevance

“…The commercial production of camel cheese is also possible by using active camel chymosin produced by expression in yeast strain, Pichia pastoris GS115 [115].…”

Section: Development Of Camel Milk Productsmentioning

confidence: 99%

Camel Milk: An Important Natural Adjuvant

et al. 2017

View full text Add to dashboard Cite

One humped camel (Camelus dromedarius) breeds, indigenous to India, have been shown to have good genetic potential to produce milk. Camel milk not only is cost-effective in terms of feed conversion but also has additional advantage of longer lactation period and unique adaptation mechanisms for warm arid and semiarid regions. The key features of camel milk in comparison with other milk are low fat with high content of unsaturated and long-chain fatty acid. The proteins are rich in lactoferrin and lysozymes, but deficient in b-lactoglobulin. It has higher percentage of total salts, free calcium, protective proteins and vitamin C, and some of the microminerals, viz iron, copper and zinc. Physicochemical properties of camel milk are also unique and useful for food processing. The shelf life of raw camel milk is 8-9 h, which can be extended up to 18-20 h through activation of camel lactoperoxidase system. Heat stability of camel milk is shown to be highest at pH 6.8, and it ferments relatively slowly compared to the cattle milk. The camel milk is successfully processed for producing a variety of products, such as fermented milk ('lassi'), soft cheese, flavored milk and 'kulfee' (a kind of ice cream). Camel milk has been traditionally used in different regions of the world as natural adjuvant for managing a variety of human diseases.

show abstract

“…The commercial production of camel cheese is also possible by using active camel chymosin produced by expression in yeast strain, Pichia pastoris GS115 [115].…”

Section: Development Of Camel Milk Productsmentioning

confidence: 99%

Camel Milk: An Important Natural Adjuvant

et al. 2017

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

“…The most popular and significant form of post-translational modification is N-glycosylation [ 61 ]. Glycosylation of various chymosins expressed in yeast has been observed for: buffalo ( Bubalus arnee bubalis ) [ 62 ], camel ( Camelus dromedaries ) [ 33 ], cow ( Bos Taurus ) [ 50 ], goat ( Capra hircus ) [ 63 ], yak ( Bos grunniens ) [ 19 ] and this is not unusual for yeast-produced proteins [ 62 ].…”

Section: Resultsmentioning

confidence: 99%

“…Hansen). The recombinant chymosin of C. dromedarius has been successfully expressed in the filamentous fungus Aspergillus niger [ 23 ] and in the yeast Pichia pastoris [ 33 ]. Chymosin from the Central Asian camel Camelus bactrianus is not characterized, but its full nucleotide sequence is known [ 34 ].…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Constitutive expression of Camelus bactrianus prochymosin B in Pichia pastoris

Akishev

Kiribayeva

Mussakhmetov

et al. 2021

Heliyon

View full text Add to dashboard Cite

Camel chymosin can be efficiently employed to produce cheese. Traditionally the rennet enzyme produced by the glands of the fourth stomach of ruminant animals (abomassum) is used in cheese making. Full-length Camelus bactrianus (Bactrian camel) prochymosin gene was synthesized and constitutively expressed in Pichia pastoris cells under glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase (GAP) promoter. It was purified by sequential anion and cation exchange chromatography. SDS-PAGE analysis resulted in two bands, approximately 42 and 35 kDa. The 42 kDa band vanished when the sample was treated with endoglycosidase H, indicating that the recombinant protein is partially glycosylated. Optimal pH for the activity of the highest-purity recombinant chymosin was pH 4.5 for cow's milk and pH 4.0 for mare's milk. The range 45–50 °C and 70 °C for cow's and mare's milk types, respectively, was found to be the most appropriate for maximal relative milk-clotting activity. Concentration of CaCl 2 that ensured the stability of the chymosin milk-clotting activity was between 20 and 50 mM with an optimum at 30 mM. Milk-clotting activity of camel recombinant chymosin and ability to make curd was successfully tested on fresh mare's milk. Pichia pastoris strain with integrated camel chymosin gene showed high productivity of submerged fermentation in bioreactor with milk-clotting activity 1412 U/mL and 80 mg/L enzyme yield. These results suggest that the constitutive expression of the camel chymosin Camelus bactrianus in the yeast Pichia pastoris has good prospects for practical applications.

show abstract

“…Tuy nhiên, để sản xuất rChIFN-α với số lượng lớn và giá thành thấp phù hợp cho chăn nuôi thì phải cân nhắc các hệ thống biểu hiện. Trong số đó, nấm men pichia pastoris là một ứng viên đầy tiềm năng, nó đã được sử dụng để biểu hiện IFN-α của nhiều loài như heo (Yu et al, 2010), bò (Iglesias-Figueroa et al, 2016), trâu (Tyagi et al, 2017), lạc đà (Wang, Wang, Li, Guo, & Liu, 2015), người (Ghosalkar, Sahai, & Srivastava, 2008;Sams et al, 2017) với sản lượng cao, và IFN-α có hoạt tính sinh học tốt. Ngoài ra, pichia pastoris có thể biểu hiện protein với hàm lượng từ miligram tới gram cả trong nghiên cứu phòng thí nghiệm lẫn trong sản xuất quy mô công nghiệp (Macauley-Patrick, Fazenda, McNeil, & Harvey, 2005) và thành phần môi trường nuôi cấy đơn giản, chi phí lên men thấp, các phương pháp sử dụng được thương mại hóa, chủng và các vector biểu hiện có sẵn trên thị trường (Invitrogen) (Zhang, Inan, & Meagher, 2000).…”

Section: Giới Thiệuunclassified

Khả năng ức chế virus gây bệnh Gumboro trên gà 3 tuần tuổi của Interferon Alpha gà

Giang¹,

Đồ²,

Quân³

2020

HCMCOUJS

View full text Add to dashboard Cite

Các bệnh dịch do virus luôn là mối đe dọa thường xuyên và gây thiệt hại nghiêm trọng cho ngành chăn nuôi gà ở Việt Nam. Interferon alpha gà tái tổ hợp (rChIFN-α, recombinant chicken interferon alpha) đã được biểu hiện thành công trên hệ thống pichia pastoris và có hoạt tính kháng virus. Do vậy nghiên cứu được thực hiện với mục tiêu xác định hiệu quả của rChIFN-α trên gà 3 tuần tuổi nhiễm virus Gumboro. Thí nghiệm tiến hành trên gà 3 tuần tuổi không có kháng thể kháng Gumboro. Gà sẽ được lây nhiễm virus Gumboro với liều 5×104 EDL50/con, sau 24 giờ lây nhiễm virus, gà được điều trị bằng cách sử dụng rChIFN-α nhỏ mắt/mũi với một trong các liều 0,1 µg/con; 1µg/con; 10µg/con hoặc 100 µg/con. Kết quả nghiên cứu cho thấy, khi điều trị bằng rChIFN-α 0,1 µg/con, tỉ lệ gà được bảo hộ và tỉ lệ gà sống tương ứng 46,7% và 80%; nhóm gà sử dụng rChIFN-α 1 µg/con, tỉ lệ gà được bảo hộ và tỉ lệ gà sống tương ứng 60,0% và 86,7%; hai nhóm gà được điều trị bằng rChIFN-α 10 µg/con và 100 µg/con có kết quả như nhau, tỉ lệ gà được bảo hộ và gà sống tương ứng 66,7% và 93,3%. Trong khi đó, nhóm đối chứng dương (gà nhiễm virus, không được điều trị), gà không được bảo hộ (tỉ lệ nhiễm bệnh là 100%) và tỉ lệ sống chỉ đạt 60,00%; đối chứng âm (gà không nhiễm virus, không xử lý với rChIFN) gà hoàn toàn không nhiễm bệnh và tỉ lệ sống 100%. Điều này đã chứng minh rChIFN-α có hiệu quả sử dụng trong điều trị bệnh Gumboro trên gà và hiệu quả này phụ thuộc liều sử dụng. Thêm nữa, hiệu giá kháng thể của gà trong thí nghiệm cho thấy, sự đáp ứng miễn dịch của gà trong các nhóm sử dụng rChIFN-α cũng không khác biệt so với gà chỉ nhiễm virus Gumboro, cho thấy rChIFN-α không gây ảnh hưởng đến đáp ứng miễn dịch của gà.

show abstract

Expression and characterization of camel chymosin in Pichia pastoris

Cited by 33 publications

References 28 publications

Camel Milk: An Important Natural Adjuvant

Camel Milk: An Important Natural Adjuvant

Constitutive expression of Camelus bactrianus prochymosin B in Pichia pastoris

Khả năng ức chế virus gây bệnh Gumboro trên gà 3 tuần tuổi của Interferon Alpha gà

Contact Info

Product

Resources

About